載藥高分子涂層及藥物的細(xì)胞生物學(xué)評價.pdf

1、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是心血管疾病死亡的重要因?yàn)橹?血管支架植入治療已經(jīng)成為一個標(biāo)準(zhǔn)的血管成形術(shù)方法,但是血管支架植入后因組織增生和血栓形成引起的再狹窄成為血管支架在臨床應(yīng)用中所面臨的主要問題。藥物涂層支架的出現(xiàn)使再狹窄率大大降低,在臨床上取得了許多突破性進(jìn)展。目前,各類抑制再狹窄的藥物涂層血管支架成為研究的熱點(diǎn),本論文制備了多種含抑制組織增生和抗凝血藥物的聚合物涂層薄膜,并采用多種細(xì)胞相容性評價方法對載藥涂層的抗增生行為進(jìn)行了較為

2、系統(tǒng)的評價。
　　 本論文選用已獲得美國FDA批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床的可降解高分子材料乙交酯-丙交酯共聚物PLGA(LA/GA=15:85)作為各種藥物涂層的高分子載體,制備了載不同種類藥物(姜黃素、雷帕霉素、肝素、姜黃素/肝素、姜黃素/雷帕霉素、肝素/雷帕霉素)、不同藥物濃度,不同混合藥物比的藥物涂層,將不載藥的PLGA涂層和裸316L不銹鋼作為對照樣。通過四唑藍(lán)比色法(MTT)細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)對藥物濃度進(jìn)行了篩選；運(yùn)用檢測乳酸脫氫酶(L

3、DH)實(shí)驗(yàn)評價了載藥涂層薄膜對血管平滑肌細(xì)胞是否具有急性毒性反應(yīng)；利用阿爾瑪藍(lán)(AlamarBlue)檢測方法評價了載藥薄膜是否能夠抑制血管平滑肌細(xì)胞和人臍內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,同時有選擇的對每組樣品中取樣進(jìn)行4,6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色實(shí)驗(yàn)以直觀評價薄膜樣品表面平滑肌細(xì)胞數(shù)目。
　　 通過MTT結(jié)果分別計算了各種藥物的半數(shù)生長抑制濃度,其中姜黃素藥物半數(shù)生長抑制濃度(IC50)為0.52μg/ml,雷帕霉素半數(shù)生長抑制

4、濃度(IC50)為2.88 ng/ml。姜黃素和雷帕霉素兩種藥物聯(lián)用后,對平滑肌細(xì)胞的抑制作用較同濃度單用時效果增強(qiáng),合用指數(shù)CI=0.89,小于1,發(fā)揮協(xié)同作用。LDH結(jié)果表明,載不同濃度姜黃素、雷帕霉素、肝素的PLGA薄膜及不同比例的姜黃素/肝素、姜黃素/雷帕霉素、肝素/雷帕霉素混合藥物的PLGA薄膜均未表現(xiàn)出急性毒性反應(yīng)。與參照樣不銹鋼相比,Alamar Blue和DAPI染色結(jié)果表明三種濃度(10wt％,20wt％和30wt％)

5、載姜黃素的PLGA薄膜均表現(xiàn)出對平滑肌細(xì)胞的顯著性抑制作用；載雷帕霉素的PLGA薄膜對平滑肌細(xì)胞同樣具有抑制作用；肝素載藥薄膜也表現(xiàn)出了對平滑肌細(xì)胞有一定的抑制作用；對于載姜黃素和雷帕霉素混合藥物薄膜,當(dāng)姜黃素/雷帕霉素混合比為5/5時的載藥PLGA薄膜抑制平滑肌細(xì)胞增殖的能力最強(qiáng)；對于載姜黃素/肝素不同混合比的PLGA薄膜,當(dāng)姜黃素/肝素混合比為7/3時的抑制效果較強(qiáng)；對于載雷帕霉素/肝素不同混合比的PLGA薄膜,當(dāng)雷帕霉素/肝素混合