養(yǎng)殖牙鲆垂體——性腺軸的生理功能及其調(diào)控研究.pdf

1、本論文以工廠化養(yǎng)殖牙鲆為研究對象，運(yùn)用電鏡技術(shù)、多種組織染色法、免疫組織化學(xué)和性激素放射免疫測定方法，對牙鲆腦垂體、性腺和血漿性類固醇激素進(jìn)行了深入的研究和分析，所得結(jié)果與結(jié)論如下： 1.養(yǎng)殖牙鲆卵巢的組織學(xué)及卵巢對外源激素的反應(yīng)性實(shí)驗(yàn)雌性牙鲆體長范圍為28.0-43.0cm，實(shí)驗(yàn)魚類卵巢發(fā)育均處于Ⅱ期，生殖細(xì)胞主要為2時相卵母細(xì)胞，單獨(dú)注射LHRH-A2、hCG和這兩種激素的聯(lián)合注射未能有效促進(jìn)生殖細(xì)胞的進(jìn)一步發(fā)育，說明該時期

2、卵巢對這兩種外源激素的刺激不敏感。 2.養(yǎng)殖牙鲆精巢顯微和超顯微結(jié)構(gòu)及精巢對外源激素的反應(yīng)性實(shí)驗(yàn)牙鲆體長為24.0-34.0cm，牙鲆精巢為小葉型，精小葉中可見精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子同時存在。絕大部分雄性牙鲆已達(dá)到性成熟，有的個體還出現(xiàn)了排精現(xiàn)象。精子無頂體，尾部為“9+2”結(jié)構(gòu)。與對照組相比，單獨(dú)注射LHRH-A2、hCG和這兩種激素的聯(lián)合注射均沒有顯著增加小葉腔中精子數(shù)量或促進(jìn)排放，說明該狀態(tài)下

3、，LHRH-A2和hCG不能有效促進(jìn)牙鲆的精巢發(fā)育。 3.養(yǎng)殖牙鲆腦垂體的組織學(xué)和免疫組織化學(xué)研究牙鲆腦垂體呈“雞心”形，由神經(jīng)垂體和腺垂體組成，腺垂體又分為RPD、PPD和PI三個部分。實(shí)驗(yàn)采用Jafri、HA和Mallory染色法，結(jié)合免疫組織化學(xué)方法和電鏡技術(shù)，對牙鲆腦垂體的6種內(nèi)分泌細(xì)胞進(jìn)行鑒定和定位。RPD主要為PRL和ACTH細(xì)胞，還有少量的TSH細(xì)胞；PPD主要有GH、GtH和TSH細(xì)胞，其中GH細(xì)胞數(shù)量最多，Gt

4、H次之；PI主要有MSH細(xì)胞。ACTH細(xì)胞非常活躍，呈流質(zhì)狀，表明實(shí)驗(yàn)魚所受脅迫程度高；而GtH細(xì)胞多處于靜止?fàn)顟B(tài)，注射外源激素沒有顯著促進(jìn)它的數(shù)量及其胞質(zhì)中分泌顆粒的增加，說明該時期GtH細(xì)胞對LHRH-A2和hCG的敏感性較低。 4.外源激素對養(yǎng)殖牙鲆血漿T和E2含量的影響 4.1雄魚血漿T對注射LHRH-A2或hCG的反應(yīng)性 單獨(dú)注射LHRH-A2或hCG時，處理后6h血漿T含量明顯下降，12h達(dá)到最低值，

5、24h時有所回升，30h時進(jìn)一步回升，但遠(yuǎn)未達(dá)到處理前水平；對照組血漿T的變化趨勢與單獨(dú)注射LHRH-A2或hCG相同。聯(lián)合注射LHRH-A2和hCG，血漿中T水平也呈下降趨勢，但與單獨(dú)注射不同的是，T的最低水平出現(xiàn)在24h而不是12h，30h時回升比較緩慢。以上結(jié)果表明，LHRH-A2和hCG的單獨(dú)或聯(lián)合注射不但沒有顯著提高反而降低了血漿T水平。 4.2雌魚血漿E2對注射LHRH-A2或hCG的反應(yīng)性雌魚單獨(dú)注射LHRH-A2

6、時，處理后6h血漿E2水平明顯下降，24h達(dá)到最低值，30h時有所回升，但尚未達(dá)到處理前水平。對照組魚類的血漿E2水平也隨著采血的進(jìn)行而逐漸降低。在單獨(dú)注射hCG時，處理后6h血漿E2水平顯著下降，12-24hE2血漿水平變化不大，30h后繼續(xù)顯著下降。在LHRH-A2和hCG聯(lián)合注射時，處理后6h血漿水平顯著下降，12h繼續(xù)顯著下降，24h達(dá)到最低值，30h時有所回升，對照組魚類血漿E2的水平變動與單獨(dú)注射LHRH-A2相同。上述結(jié)果

7、表明：單獨(dú)或聯(lián)合注射LHRH-A2和hCG沒有顯著提高反而降低了E2血漿水平。 5.結(jié)論與建議5.1工廠化養(yǎng)殖環(huán)境中，雄性牙鲆可以達(dá)到性成熟，盡管如此，注射LHRH-A2或hCG卻沒有對精子的排放起到顯著的促進(jìn)作用，推測人工養(yǎng)殖環(huán)境對牙鲆性腺發(fā)育和生殖過程是不利的，這種雄魚如果作為后備親魚可能會影響其生殖力。雌性牙鲆性腺發(fā)育進(jìn)程明顯滯后，僅發(fā)育至Ⅱ期，說明工廠化養(yǎng)殖牙鲆性腺發(fā)育受阻，下丘腦-垂體-性腺軸生理功能低下，對外源激素的

8、刺激不敏感。 5.2牙鲆腦垂體PPD部位GH細(xì)胞數(shù)量較多，與其處于生長的旺盛期相一致；GtH細(xì)胞的數(shù)量較少，排放現(xiàn)象不明顯，與性腺發(fā)育狀態(tài)和血漿性類固醇含量波動相一致；RPD部ACTH細(xì)胞的數(shù)量多，且處于活躍的分泌狀態(tài)，表明魚類遭受脅迫且程度較高。外源性LHRH-A2或hCG對實(shí)驗(yàn)牙鲆GtH均未表現(xiàn)出明顯的誘導(dǎo)作用。 5.3注射外源性LHRH-A2或hCG不能有效促進(jìn)血漿中T和E2的含量提高，說明此時牙鲆的下丘腦—垂體—