BDNF、NGF對(duì)新生大鼠嗅感覺神經(jīng)元的影響.pdf

1、目的：培養(yǎng)新生大鼠嗅感覺神經(jīng)元(olfactory receptor neurons，ORNs)，觀察BDNF、NGF對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育的影響，為可再生ORNs快速增殖提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)，這將為研究神經(jīng)元的損傷修復(fù)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、嗅覺障礙的治療等開辟一條新的途徑。 方法：取Wistar大鼠(出生3～4天，重8～10g)嗅黏膜，經(jīng)酶消化法分離嗅細(xì)胞后，加MEMD-va-line培養(yǎng)基聯(lián)合10％胎牛血清(FBS)及阿糖胞苷培養(yǎng)ORNs。并

2、將其分成四組，分別是神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)組；腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(brain derived neuro-trophic factor，BDNF)組；NGF和BDNF聯(lián)合組；對(duì)照組(只含血清的培養(yǎng)液)。應(yīng)用神經(jīng)微絲蛋白(neurofilament protein，NFP)、嗅覺標(biāo)記蛋白(olfactory marker protein，OMP)行免疫組化檢測(cè)及電鏡技術(shù)鑒定ORNs。在細(xì)胞培養(yǎng)5、8

3、、11天，采用顯微鏡下目測(cè)微尺測(cè)量雙極細(xì)胞突起長(zhǎng)度及不同形態(tài)細(xì)胞數(shù)量的變化。采用Western Blot檢測(cè)成熟ORNs的特異性標(biāo)記蛋白-OMP，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)ORNs表達(dá)量的動(dòng)態(tài)變化。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，作多因素方差分析，比較各級(jí)間細(xì)胞突起長(zhǎng)度差異，并作t檢驗(yàn)分析。 結(jié)果：新生大鼠嗅黏膜經(jīng)酶消化法分離后，MEMD-valine培養(yǎng)基聯(lián)合10％的胎牛血清及阿糖胞苷，可以有效抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)。在不同時(shí)間點(diǎn)，顯微鏡下顯

4、示ORNs形態(tài)變化，胞體透亮，細(xì)胞狀態(tài)好且數(shù)量多；OMP、NFP標(biāo)記雙極細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)；掃描電鏡清晰地顯示雙極樣細(xì)胞的突起及細(xì)胞分裂狀態(tài)；目測(cè)微尺測(cè)量雙極細(xì)胞突起長(zhǎng)度和不同形態(tài)細(xì)胞數(shù)量的變化，NGF組與BDNF組細(xì)胞突起長(zhǎng)度對(duì)比P＞0.05，其余組間對(duì)比P＜0.01，圓形與梭形細(xì)胞NGF組與對(duì)照組對(duì)比P＞0.05；Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示：聯(lián)合組細(xì)胞ORNs蛋白含量高于NGF組及對(duì)照組。 結(jié)論：BDNF、NGF的聯(lián)合