慢乙肝患者M(jìn)oDC表面PD-LI分子的表達(dá)及其對(duì)T淋巴細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的: 了解慢性乙型肝炎患者M(jìn)oDC（monocyte derived dendritic cells）表面PD-L1分子的表達(dá)，觀察PD-L1/ PD-1 途徑對(duì)HBV 特異性T 淋巴細(xì)胞免疫功能的影響，為制訂慢乙肝免疫治療策略提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法: 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者，慢性HBV攜帶者（asymptomatic carrier, ASC），和健康人外周

2、血MoDC 表面PD-L1 的表達(dá)情況，同時(shí)檢測(cè)ALT、HBV-DNA 水平。替比夫定抗病毒治療前后分別體外培養(yǎng)CHB患者M(jìn)oDC, HBsAg 負(fù)載后用TNF-α促成熟。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MoDC 表面PD-L1、共刺激分子CD80、CD86 及HLA-DR 的表達(dá)變化；MoDC 和異體T 淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，以PD-L1 單克隆抗體對(duì)PD-L1/ PD-1 途徑進(jìn)行阻斷處理，MTT 法檢測(cè)HBV特異性T 淋巴細(xì)胞增殖能力；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

3、（ELISA）檢測(cè)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-12、IFN-γ、IL-10 的濃度。
　　 結(jié)果: PD-L1 在CHB 患者外周血MoDC 上的表達(dá)高于病毒攜帶者組和健康對(duì)照組，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且PD-L1 的表達(dá)水平與患者的ALT 水平、病毒載量呈正相關(guān)； MoDC 表面CD80 在抗病毒治療三個(gè)月時(shí)較治療前有所降低，六個(gè)月時(shí)較治療三個(gè)月時(shí)有所上升但仍未恢復(fù)至治療前水平；CD86和HLA-DR

4、隨抗病毒時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，以HLA-DR 的升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）；PD-L1 較治療前有所下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；阻斷PD-L1/PD-1 途徑能夠促進(jìn)HBV 特異性T 淋巴細(xì)胞的增殖和分泌IL-12、IFN-γ的能力，降低IL-10 的分泌。在抗病毒治療前、抗病毒治療三個(gè)月、六個(gè)月時(shí)，封閉組T淋巴細(xì)胞的增殖能力均大于相應(yīng)未封閉組和免疫球蛋白組。其中，以抗病毒治療前和抗病毒治療六個(gè)月時(shí)，T 淋巴細(xì)胞的增殖較

5、明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而治療三個(gè)月時(shí)T 細(xì)胞的增殖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別（P>0.05）。封閉PD-L1 途徑后，抗病毒治療六個(gè)月時(shí)T 細(xì)胞的增殖大于抗病毒治療三個(gè)月和治療前水平，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在未封閉PD-L1 途徑情況下，抗病毒治療三個(gè)月時(shí)T 細(xì)胞的增殖能力大于治療六個(gè)月時(shí)的水平，而抗病毒治療六個(gè)月時(shí)T 細(xì)胞的增殖大于治療前水平，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。隨著抗病毒治療時(shí)間的延長(zhǎng)， MLR 培養(yǎng)上清

6、中的IL-12、IFN-γ升高，IL-10 降低。封閉PD-L1 途徑后， IL-12、IFN-γ升高，IL-10 降低的程度明顯高于相應(yīng)未封閉組和免疫球蛋白組。
　　 結(jié)論: CHB 患者外周MoDC 表面PD-L1 表達(dá)水平的升高，降低了HBV 特異性T 淋巴細(xì)胞的免疫功能；替比夫定抗病毒治療能夠部分改善MoDC 功能，但對(duì)MoDC 表面PD-L1 表達(dá)水平無(wú)明顯影響；在替比夫定抗病毒治療基礎(chǔ)上阻斷PD-L1/PD-1 途徑