HCPT脂質(zhì)體經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈內(nèi)注射的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:①建立以高效液相色譜(HPLC)-熒光檢測(cè)法測(cè)定日本大白兔血漿及肝臟組織中羥基喜樹堿(HCPT)濃度的方法。
　　②對(duì)比研究經(jīng)靜脈注射HCPT溶液或HCPT脂質(zhì)體后日本大白兔血漿中藥物濃度隨時(shí)間變化的趨勢(shì)及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　③采用不同介入方法經(jīng)導(dǎo)管兔肝動(dòng)脈內(nèi)引入HCPT溶液或HCPT脂質(zhì)體,比較在兔VX2肝癌模型腫瘤中心及周邊組織中的藥物濃度及藥物持續(xù)時(shí)間,從而針對(duì)肝癌的治療優(yōu)選一種經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈給藥的方法。
　

2、　方法:①采用HPLC-熒光檢測(cè)法,檢測(cè)器激發(fā)波長為360nm,發(fā)射波長為580nm,色譜柱為WatersSymmetryC18柱(5μm,3.9×150mm),預(yù)柱為ShimadzuWondasilC18柱(5μm,4.0×10mm),流動(dòng)相為乙腈:0.15mM醋酸銨(PH6.5)緩沖液(30:70,v/v),流速為1ml/min,采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定血漿及組織中的藥物濃度。
　?、谌?只日本大白兔,以有效藥物濃度為1mg/kg經(jīng)耳緣

3、靜脈分別注射HPCT溶液或HCPT脂質(zhì)體,分別于給藥后2,5,10,15,30,45,60,90,120,180,240分鐘各取血并檢測(cè)血藥濃度,采用3P87藥代動(dòng)力學(xué)計(jì)算程序進(jìn)行房室模型擬合,比較靜脈注射兩種藥物劑型在日本大白兔血漿中藥物濃度隨時(shí)間變化的趨勢(shì)及相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　?、劢⑼肰X2肝癌動(dòng)物模型,MRI掃描檢查腫瘤種植情況及生長狀況,將60只荷瘤兔隨機(jī)分成4組,采用4種不同的介入方法經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈內(nèi)引入HCPT溶液

4、或HCPT脂質(zhì)體,A組:HCPT脂質(zhì)體與碘油混懸后經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈灌注+聚乙烯醇(PVA)經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈栓塞;B組:HCPT脂質(zhì)體經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈灌注+聚乙烯醇(PVA)經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈栓塞;C組:HCPT溶液與碘油混懸后經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈灌注+聚乙烯醇(PVA)經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈栓塞;D組:HCPT溶液經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈灌注+聚乙烯醇(PVA)。于給藥后6小時(shí)、1天、3天、6天、10天處死實(shí)驗(yàn)兔并檢測(cè)肝臟腫瘤中心及周邊組織中HCPT的濃度。
　　結(jié)果:(1)日本大白兔血漿及

5、肝臟組織中HCPT峰與內(nèi)標(biāo)喜樹堿(CPT)峰分離良好,內(nèi)源性物質(zhì)不干擾樣品峰,HCPT保留時(shí)間為2.4min,內(nèi)標(biāo)物(CPT)保留時(shí)間為4.8min。兔血漿及肝臟組織中HCPT在濃度0.2-20μg/ml及1-200ng/ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999。血漿中HCPT的提取回收率為94.68％-103.60%,日間與日內(nèi)變異均小于10%,肝臟組織中HCPT的提取回收率為96.68%-117.00%,日間與日內(nèi)變異均小

6、于10%,最低檢測(cè)濃度為0.5ng/ml。
　　(2)注射HCPT溶液及HCPT脂質(zhì)體符合權(quán)重為1/C/C的三室模型。HCPT溶液靜脈注射后在實(shí)驗(yàn)兔體內(nèi)代謝速度快,其分布半衰期t1/2α為9.1348min,消除半衰期t1/2β為25.2492min,而HCPT脂質(zhì)體的分布半衰期t1/2α為18.7772min,消除半衰期t1/2β為136.248min,明顯高于HCPT溶液組,HCPT脂質(zhì)體AUC大于HCPT溶液AUC,HCPT

7、脂質(zhì)體CL低于HCPT溶液CL,HCPT脂質(zhì)體Vc小于HCPT溶液Vc。
　　(3)在介入處理后腫瘤組織中心及周邊組織中HCPT的濃度隨著時(shí)間逐漸減少。組間同一時(shí)間點(diǎn)同一部位的HCPT濃度比較:介入處理6小時(shí)后取出的標(biāo)本中,腫瘤中心及周邊組織中HCPT濃度均為A組>C組>D組、B組>C組>D組(P<0.05),A組與B組組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;1天后取出的標(biāo)本中,D組腫瘤中心及周邊組織中HCPT的濃度低于最低檢測(cè)限無法測(cè)得,腫瘤中心及周

8、邊組織的HCPT濃度均為A組>C組、B組>C組(P<0.05),A組與B組組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;3天后取出的標(biāo)本中,D組腫瘤中心及周邊組織中的HCPT濃度低于最低檢測(cè)限無法測(cè)得,腫瘤中心及周邊組織中的HCPT濃度均為A組>B組>C組(P<0.05);7天后取出的標(biāo)本中,C組和D組腫瘤中心及周邊組織中的HCPT濃度低于最低檢測(cè)限無法測(cè)得,腫瘤中心及周邊組織中的HCPT濃度均為A組>B組(P<0.05);10天后取出的所有標(biāo)本中HCPT濃度均低

9、于最低檢測(cè)限無法測(cè)得。
　　組內(nèi)同一時(shí)間點(diǎn)不同部位的HCPT濃度比較:介入處理6小時(shí)后取出的標(biāo)本中,4個(gè)組的腫瘤中心的HCPT濃度均高于腫瘤周邊組織,其中B組和D組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,A組和C組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;1天后取出的標(biāo)本中,比較A、B、C三個(gè)組均為腫瘤周邊組織的HCPT濃度高于腫瘤中心,均無顯著性差異;3天后取出的標(biāo)本中,比較A、B、C三個(gè)組,結(jié)果均顯示腫瘤周邊組織的HCPT濃度均高于腫瘤中心,均無顯著性差異;7天后取出的標(biāo)本中,比

10、較A、B兩個(gè)組,腫瘤周邊組織的HCPT濃度均高于腫瘤中心,也均無顯著性差異。
　　結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)所采用的高效液相色譜-熒光檢測(cè)法可以用于日本大白兔血漿及肝臟中羥基喜樹堿藥物含量的檢測(cè),檢驗(yàn)結(jié)果可靠。
　　(2)HCPT脂質(zhì)體較HCPT溶液無論是在兔血漿中還是在肝臟腫瘤中心及周邊組織中都有更強(qiáng)的緩釋作用,能夠維持更長時(shí)間。
　　(3)在經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈內(nèi)化療栓塞時(shí),HCPT脂質(zhì)體與碘油混懸后經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈灌注+聚乙烯醇(PVA