熒光磁性納米粒子標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞靶向胃癌的研究.pdf

1、目的：
　　(l)建立一種高效、簡便的分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)的方法；
　　(2)明確熒光磁性納米粒子(fluorescent magnetic nanoparticles，F(xiàn)MNPs)標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的適當(dāng)濃度；
　　(3)檢驗FMNPs體外標(biāo)記BMSCs的效果；
　　(4)探討B(tài)MSCs靶向胃癌的遷移的能力。
　　方法：
　

2、　(1)利用貼壁培養(yǎng)法分離、純化大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD29、CD90和CD45的表達(dá)情況，分別用成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)干細(xì)胞檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分化能力；
　　(2)體外用不同濃度的FMNPs標(biāo)記BMSCs，觀察不同濃度的FMNPs對細(xì)胞活力的影響，進(jìn)而選取最佳標(biāo)記的FMNPs濃度量；利用普魯士藍(lán)染色，激光共聚焦顯微鏡，核磁共振成像儀觀察熒光磁性納米粒子標(biāo)記的干細(xì)胞體外成像效果；

3、　　(3)建立裸鼠的胃癌模型，應(yīng)用小動物分子影像系統(tǒng)和核磁共振成像儀驗證靜脈注射被標(biāo)記的BMSCs靶向胃癌的能力。
　　結(jié)果：
　　(1)利用貼壁培養(yǎng)法分離、純化大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測第三代BMSCs的CD29，CD90和CD45的陽性表達(dá)率分別為84.69％，90.28%，0.72%，堿性磷酸酶染色和油紅 O染色結(jié)果均表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成功分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞；
　　(2)熒光磁性納米粒子與骨髓

4、間充質(zhì)干細(xì)胞共同培養(yǎng)，不同時間點檢測干細(xì)胞存活率，進(jìn)而選取熒光磁性納米粒子的最佳標(biāo)記濃度為50?g/mL。普魯士藍(lán)染色，激光共聚焦成像和核磁共振成像表明熒光磁性納米粒子體外成功標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并且不影響細(xì)胞活性;
　　(3)建立裸鼠的胃癌模型，胃癌細(xì)胞 MGC803皮下注射入裸鼠體內(nèi)，四周后篩選成瘤效果好的裸鼠胃癌模型，并將標(biāo)記后的干細(xì)胞尾靜脈注射入裸鼠體內(nèi)，14天后用小動物分子成像系統(tǒng)觀察到BMSCs遷移靶向到胃癌部位。隨后

5、，處死裸鼠，取出心、肺、肝、脾、腎和腫瘤塊進(jìn)行器官離體熒光成像，結(jié)果顯示被標(biāo)記組分的腫瘤呈現(xiàn)出顯著的熒光信號，除了肝（具有代謝異物的能力），其他臟器如心、脾、肺、腎都沒有熒光信號。對另一組FMNPs標(biāo)記的BMSCs移植后的胃癌裸鼠模型進(jìn)行MRI掃描，在腫瘤部位3.0 T的磁場強度下有清晰的磁共振信號。
　　結(jié)論：
　　(l)貼壁篩選法操作簡單，篩選出的細(xì)胞易于成活，是一種簡便有效的方法；
　　(2)適當(dāng)濃度FMNPs能

6、夠高效標(biāo)記BMSCs；
　　(3)BMSCs具有高度特異性地靶向胃癌的能力。
　　意義：
　　本實驗證明BMSCs具有靶向遷移到胃癌的能力。此外，BMSCs具有取材便捷、體外擴增能力強、基因轉(zhuǎn)染效率高、轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定表達(dá)、可自體回輸從而避免了免疫排斥反應(yīng)等特點，被認(rèn)為是基因工程的理想種子細(xì)胞，這為以BMSCs為載體的胃癌靶向基因治療提供了理論依據(jù)。然而，目前關(guān)于BMSCs向胃癌細(xì)胞靶向遷移的分子機制尚未明確，有待于深入研究