GRIM-19及其靶基因STAT-3在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。據(jù)美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，2008年全球有1383500名婦女患乳腺癌，死亡病例數(shù)為458400。其在婦女惡性腫瘤的發(fā)生中占23％，在惡性腫瘤導(dǎo)致婦女死亡的病例中占14％，成為導(dǎo)致婦女死亡的首要原因。近年來，乳腺癌在全球的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，中國(guó)成為乳腺癌發(fā)病率增長(zhǎng)最快的國(guó)家之一。乳腺癌病因復(fù)雜，大量研究相繼發(fā)現(xiàn)與之相關(guān)的因素因子，但確切發(fā)病機(jī)制并未解明。干擾素/維甲酸合并誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡基因( gen

2、e associated with retinoid-IFN-induced mortality，GRIM)是最近發(fā)現(xiàn)的一群參與干擾素(IFN)和維甲酸(RA)合并誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡基因，其中GRIM-19基因在多種正常組織中表達(dá)，參與IFN/RA誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡，推測(cè)它很可能是抑癌基因。該基因參與細(xì)胞增殖、凋亡的調(diào)控過程，其表達(dá)的降低或位點(diǎn)的突變可導(dǎo)致細(xì)胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化。而轉(zhuǎn)錄信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與激活子-3(signal stransdu

3、cer and activator of sranscription， STAT-3)在乳腺癌中持續(xù)性活化，表達(dá)水平明顯增強(qiáng)，具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移及免疫逃逸等重要作用。GRIM-19則被認(rèn)為是STAT-3表達(dá)和激活的負(fù)性調(diào)節(jié)因子。本研究旨在分析兩種基因在乳腺良性疾病組織及乳腺癌組織中表達(dá)的差異，探討兩種基因表達(dá)的相關(guān)性及其臨床意義。
　　 方法：收集濟(jì)南市中心醫(yī)院2008年5月-2010年4月行手

4、術(shù)切除的乳腺癌標(biāo)本64例作為乳癌組，其中“非三陰性”乳腺癌54例，“三陰性”乳腺癌10例。同時(shí)收集同期乳腺增生及腺瘤組織標(biāo)本30例作為對(duì)照組。臨床分期根據(jù)UICC（1997年）標(biāo)準(zhǔn)。采用常規(guī)免疫組織化學(xué)染色SP法，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。常規(guī)甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片；脫蠟水化，3％過氧化氫浸泡10min，微波修復(fù)（GRIM-19采用pH6.0檸檬酸，STAT-3采用pH8.0EDTA），中高火10min，中低火10min，

5、冷卻至室溫；滴加血清封閉，37℃孵育30min，后滴加一抗，37℃孵育90min，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗后滴加生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育20min，沖洗，滴加辣根過氧化酶標(biāo)記的三抗，37℃孵育30min，沖洗后DAB顯色，復(fù)染封片。陽性對(duì)照采用試劑說明標(biāo)記組織，陰性對(duì)照用PBS代替一抗。
　　 試劑一抗選用Abcam公司鼠抗人多克隆抗體GRIM-19(ab88094)、鼠抗人單克隆抗體STAT-3(ab32500)、SP試

6、劑盒以及二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑購(gòu)自福州邁新公司。陽性對(duì)照采用試劑說明標(biāo)記組織，陰性對(duì)照用PBS代替一抗。免疫組化陽性標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)組織細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占比例以及染色深度進(jìn)行綜合評(píng)分。陽性細(xì)胞所占比例為隨機(jī)選取5個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞（圖1）。陽性細(xì)胞≤10％記為0分，10％～25％為1分，＞25％～50％為2分，＞50％～100％為3分。染色深度：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。兩個(gè)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的乘積作為該標(biāo)本

7、的積分，≤2分為陰性，＞2分為陽性。
　　 結(jié)果：
　　 1． GRIM-19蛋白在乳癌組中的陽性表達(dá)率為29.7％(19/64)，明顯低于良性對(duì)照組中的83.3％(25/30)表達(dá)率，兩組間差別有顯著性(p＜0.01)；STAT-3蛋白在乳癌組中的陽性表達(dá)率為85.9％(55/64)，明顯高于對(duì)照組的10.0％(3/30)表達(dá)率，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。
　　 2． GRIM-19在“三陰性”乳腺癌中

8、的表達(dá)顯著低于在非“三陰性”乳腺癌中的表達(dá)(p＜0.05)；而在不同年齡、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長(zhǎng)因子受體(HER-2/neu)的組間表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。STAT-3在各臨床病理指標(biāo)中的表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1． GRIM-19在乳腺癌中的表達(dá)降低，其表達(dá)的缺失可誘導(dǎo)乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展。
　　 2．乳腺癌中GRIM