神經(jīng)再生室內(nèi)植入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立大鼠坐骨神經(jīng)損傷神經(jīng)再生室模型,觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)植入神經(jīng)再生室后對(duì)神經(jīng)功能恢復(fù)的影響,并初步探討其作用機(jī)理。 方法：采用全骨髓法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,待原代培養(yǎng)的細(xì)胞達(dá)70％以上匯合時(shí),用含胰酶和EDTA的消化液消化細(xì)胞,進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳至第3代的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞采用流式細(xì)胞術(shù)檢測表面抗CD44、CD45、CD71的表達(dá),從

2、而對(duì)傳代培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。將32只Wistar大鼠隨機(jī)分成兩組,即實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組16只。兩組大鼠均行左側(cè)的坐骨神經(jīng)銳性切斷,推剝神經(jīng)外膜,使遠(yuǎn)近端的神經(jīng)束露出2mm左右,用刀再切除神經(jīng)纖維2mm,使神經(jīng)束縮回外膜內(nèi),隨即予以顯微縫合,形成神經(jīng)再生室。實(shí)驗(yàn)組的神經(jīng)斷端植入傳3代并且用BrdU標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,而對(duì)照組則植入純的DMEM培養(yǎng)液。分別在術(shù)后第4周和第8周,通過一般狀況觀察、神經(jīng)電生理、免疫組化等方面進(jìn)

3、行觀察。 結(jié)果：在光學(xué)顯微鏡下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈紡錘形、成纖維細(xì)胞樣生長,漩渦狀分布。傳至第3代的細(xì)胞形態(tài)趨于一致,經(jīng)免疫熒光染色P3的骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)特異性標(biāo)志物:CD45(-),CD44(+),CD71(+)。 大體觀察,兩組大鼠足底均有潰瘍形成,實(shí)驗(yàn)組潰瘍愈合較對(duì)照組早。術(shù)后第3周,兩組大鼠跛行改善,步態(tài)較穩(wěn)。肉眼觀察發(fā)現(xiàn),神經(jīng)切斷處周圍有肌肉組織粘連,清除粘連組織后,可以觀察到神經(jīng)切斷處愈合良好。術(shù)后第4周和