胎兒皮膚和增生性瘢痕組織內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：研究基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)在不同發(fā)育時(shí)期的胎兒皮膚和不同形成時(shí)期的增生性瘢痕中基因表達(dá)和蛋白含量、分布的變化，探索無(wú)瘢痕愈合發(fā)生機(jī)制以及增生性瘢痕發(fā)生和成熟的部分機(jī)制。 方法：①胎兒皮膚因創(chuàng)傷等意外因素終止妊娠的胎兒背部全層皮膚，共18例，胎齡(EGA)13～33周。標(biāo)本按胎齡分為3組，即早期(13～19周)，中期(21～25周)和晚期(27～33周)，每組6例。②增生性瘢痕組

2、織取自進(jìn)行整形手術(shù)患者的增生性瘢痕16例，平均年齡為26歲，傷口愈合的時(shí)間為4月～11年。瘢痕增生時(shí)間1年以內(nèi)8例，1～2年4例，2年以上4例。正常對(duì)照組皮膚8例，取自病人供皮區(qū)的全層皮膚。標(biāo)本經(jīng)無(wú)菌取材后，一部分立即液氮凍存，用于進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Westernblot實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)MMP-1，MMP-2，MMP-3，MMP-7，MMP-9，MMP-14，TIMP-1，TIMP-2和TIMP-3基因表達(dá)和蛋白含量的

3、變化；另一部分標(biāo)本經(jīng)10％中性甲醛液固定，脫水，石蠟包埋后切片，用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，鏡下觀察。 結(jié)果：1.在早期妊娠胎兒皮膚中MMP-1，MMP-2，MMP-3，MMP-7，MMP-9及MMP-14的基因表達(dá)和蛋白含量均較低，隨著胎齡的增加，表達(dá)水平逐漸升高，在妊娠晚期皮膚中這些基因的mRNA和蛋白含量都顯著增強(qiáng)(P＜0.05)。TIMP-2和TIMP-3的基因表達(dá)和蛋白含量呈相同的變化趨勢(shì)，隨著胎兒皮膚不斷發(fā)育而逐漸升高。在不同

4、妊娠時(shí)期的胎兒皮膚中，TIMP-1基因表達(dá)變化不顯著，但蛋白含量水平則逐漸增大，在妊娠晚期皮膚內(nèi)含量明顯高于妊娠早期(P＜0.05)。 2.在正常皮膚組織內(nèi)，MMPs和TIMPs的基因表達(dá)較弱，蛋白含量較低，蛋白陽(yáng)性顆粒主要分布于表皮基底層細(xì)胞和少量的成纖維細(xì)胞中；在增殖期的瘢痕中MMPs和TIMPs基因和蛋白表達(dá)都顯著升高(P＜0.05)，在成熟期的瘢痕中，MMPs基因表達(dá)量降至正常水平，但蛋白含量明顯高于正常皮膚(P＜0.0

5、5)，蛋白顆粒主要定位于表皮細(xì)胞和部分成纖維細(xì)胞中；在成熟期瘢痕內(nèi)，TIMP-3蛋白含量高于正常皮膚，而TIMP-1和TIMP2蛋白含量則降至正常水平。 結(jié)論：1.MMPs和TIMPs對(duì)皮膚的生長(zhǎng)發(fā)育、結(jié)構(gòu)功能的維持以及創(chuàng)面修復(fù)具有重要的調(diào)節(jié)作用。 2.TIMPs基因低表達(dá)可能與胎兒皮膚創(chuàng)面無(wú)瘢痕愈合相關(guān)，TIMPs基因表達(dá)增強(qiáng)，蛋白含量升高可能是促進(jìn)傷口愈合后形成瘢痕的機(jī)制之一。 3.在增殖期瘢痕中MMPs基因

6、和蛋白表達(dá)增強(qiáng)可能與成纖維細(xì)胞大量增殖、快速遷移，肉芽組織過(guò)度增生，組織發(fā)生重建，形成增生性瘢痕有關(guān)；TIMPs基因表達(dá)和蛋白含量升高可能是在反饋信號(hào)誘導(dǎo)下，抑制MMPs過(guò)量表達(dá)對(duì)機(jī)體的損傷，同時(shí)也可能是增生性瘢痕形成的機(jī)制之一。 4.在成熟期瘢痕中MMPs基因表達(dá)恢復(fù)到正常水平，這可能與炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子等含量降低有關(guān)，但蛋白仍大量積累，而TIMP-1，2含量降低，共同促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，使得增生性瘢痕達(dá)到相對(duì)穩(wěn)定的成熟狀態(tài)