單細胞基因分析在霍奇金淋巴瘤H-R-S細胞性質研究中的應用.pdf

1、目的:應用激光捕獲顯微切割系統(tǒng)(LCM)結合免疫組化標記從組織切片中分離、獲取單細胞和少量背景細胞的方法，建立一套優(yōu)化的單細胞PCR反應體系和條件，應用于H/R-S細胞的起源和克隆性及其與背景淋巴細胞相關性的研究。 方法:聯(lián)合應用LCM技術和免疫組化標記定位，從4例CHL(包括2例MC型和2例NS型)石蠟包埋組織切片上挑選CD30陽性的H/R-S細胞和CD20陽性的背景B淋巴細胞，每組管收集3個R-S細胞和5-20個背景B淋巴細

2、胞。提取細胞DNA后采用K家族特異性引物中的Vk3/JK3，經(jīng)半巢式PCR檢測IgL基因重排。PCR擴增產物經(jīng)0.2％瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像分析系統(tǒng)紫外投射儀下觀察目的條帶，統(tǒng)計學方法采用X<'2>檢驗。 結果:IgL基因重排擴增結果：PCR產物目的條帶皆約為310bp，4例CHL中每3個H/R-S細胞的IgL基因重排陽性率分別為25.00％、33.33％、20.00％、21.44％，合計總陽性率25.29％，4例CHL之H

3、/R-S細胞IgL基因重排陽性率無顯著差異。本實驗還在相應的病例中檢測到H/R-S細胞周圍的B淋巴細胞群存在克隆性IgL基因重排，重排條帶也都約為310bp。 結論: 1．H/R-S細胞存在克隆性IgL基因重排，進一步支持大部分CHL中H/R-S細胞起源于B細胞。 2．每3個H/R-S細胞均出現(xiàn)相同的310bp擴增產物，提示實驗所用的三個腫瘤細胞可能來自同-B細胞克隆，一定程度上說明了H/R-S細胞的單克隆性。