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文檔簡介
1、目的:探討粟米草甾體皂甙(Mollugo pentaphylla)對SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞(Rat Aortic Smooth Muscle Cells,RASMC)增殖、遷移以及膠原蛋白合成的影響。 方法:采用組織塊貼壁培養(yǎng)法原代培養(yǎng)SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞,選用第5代VSMC作為實驗對象。實驗按以下分組:①空白對照組(含10% FBS培養(yǎng)液);②溶劑對照組(含1%DMSO+10% FBS培養(yǎng)液);③不同濃度的粟米草甾體
2、皂甙組(1、3、9、27μmol/L粟米草甾體皂甙孵育60min后加入10%FBS)。采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法觀察不同濃度的粟米草甾體皂甙對VSMC增殖,選用細胞刮片法觀察不同濃度的粟米草甾體皂甙對VSMC遷移的影響,選用比色法觀察不同濃度的粟米草甾體皂甙對VSMC的羥脯氨酸含量的影響。 結果:(1)VSMC的鑒定:通過倒置相差顯微鏡觀察細胞呈梭形或長梭形,細胞經(jīng)抗α-actin抗體檢測后,光鏡下可見細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)黃褐色顆
3、粒,呈陽性,而對照組呈陰性,細胞胞漿內(nèi)未見黃褐色顆粒。光鏡和免疫細胞化學法鑒定,均證實成功培養(yǎng)出大鼠VSMC,且純度較高。 (2)MTT法檢測不同濃度粟米草甾體皂甙藥物組對VSMC增殖的影響:與溶劑對照組和空白對照組相比,1μmol/L粟米草甾體皂甙藥物組的VSMC吸光度OD值雖有增加,在72h時,與空白對照組相比抑制率為22.7%,但無統(tǒng)計學差異(P>0.05);與空白對照組相比,濃度分別為3、9、27μmol/L粟米草甾體皂
4、甙藥物組的吸光值度OD值均較低,在72h時,VSMC增殖抑制最明顯,其增殖的抑制率分別為42.8%(P<0.01)、62.4%(P<0.01)、69.7%(P<0.01)。MTT法結果顯示,粟米草甾體皂甙能抑制VSMC的增殖,具有濃度依賴性。 (3)細胞刮片法檢測不同濃度粟米草甾體皂甙藥物組對VSMC遷移的影響:細胞刮片法顯示空白對照組VSMC遷移距離明顯增加,與溶劑對照組相比無顯著性差異(P>0.05);1、3、9、27μmo
5、l/L粟米草甾體皂甙藥物組與空白對照組相比VSMC遷移距離減少,有顯著性差異(P>0.05),細胞遷移抑制率分別為4.4%(P<0.05~0.01)、12.4%(P<0.01)、20.5%(P<0.01)和33.7%(P<0.01)。細胞刮片法結果表明:粟米草甾體皂甙能明顯抑制VSMC遷移,具有濃度依賴性。 (4)比色法檢測不同濃度粟米草甾體皂甙藥物組對VSMC羥脯氨酸合成的影響:與空白對照組和溶劑對照組相比,粟米草甾體皂甙低濃
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