CD4+CD29+T細(xì)胞在濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎中的作用研究.pdf

1、目的:
　　通過病證結(jié)合方法建立濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)大鼠模型，與脾虛型UC及單純濕熱證大鼠模型相對(duì)比，并與臨床研究相參照，從癥狀、病理及免疫學(xué)三個(gè)方面探討CD4+CD29+T細(xì)胞在濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎中的作用及其可能機(jī)制，以完善UC的免疫學(xué)機(jī)制。
　　方法:
　　1.臨床標(biāo)本收集
　　從南方醫(yī)院健康體檢者及消化內(nèi)科患者中遴選出符合本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象，分為健康對(duì)照組、濕熱腸炎

2、組、濕熱UC組及脾虛UC組，收集其外周血及結(jié)腸黏膜標(biāo)本。
　　2.動(dòng)物模型的構(gòu)建與分組
　　采用高濕高溫+高脂高糖飼料喂養(yǎng)的方法建立濕熱模型;采用隔日足量飲食+番瀉葉灌胃+游泳疲勞的方法建立脾虛模型。在證型造模的基礎(chǔ)上加用2，4-二硝基氯苯(DNCB)及乙酸誘發(fā)UC，分別造成濕熱型及脾虛型UC大鼠模型。造模完成后分為單純濕熱組、濕熱UC組及脾虛UC組，與正常組對(duì)比，收集外周血和結(jié)腸標(biāo)本。
　　3.檢測(cè)指標(biāo)及檢測(cè)方法

3、r>　　用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)外周血中CD4+CD29+T細(xì)胞百分率，用免疫熒光法測(cè)結(jié)腸中CD4+CD29+T細(xì)胞的表達(dá)。用ELISA法測(cè)血清及大鼠結(jié)腸中TNF-α及IL-8水平，用免疫組化法測(cè)結(jié)腸中MPO及VCAM-1的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　各檢測(cè)指標(biāo)在大鼠及人中的變化趨勢(shì)呈一致性。
　　1.與正常組/健康對(duì)照組比較，外周血CD4+CD29+T細(xì)胞在濕熱UC及脾虛UC組升高(P＜0.05)，且濕熱UC組高于脾虛UC組(P＜

4、0.05)，但在單純濕熱/濕熱腸炎組無(wú)升高。
　　2.CD4+CD29+T細(xì)胞及結(jié)腸VCAM-1在正常組/健康對(duì)照組結(jié)腸中無(wú)明顯表達(dá)，在其他各組均有不同程度表達(dá)，其中以濕熱UC組的熒光強(qiáng)度最強(qiáng)、分布范圍最廣。
　　3.與正常組/健康對(duì)照組比較，血清中TNF-α、IL-8及結(jié)腸TNF-α、IL-8、MPO在其他各組均升高(P＜0.05)，濕熱UC組高于脾虛UC組(P＜0.05)，但脾虛UC組與單純濕熱/濕熱腸炎組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5、
　　4.外周血CD4+CD29+T細(xì)胞水平與疾病活動(dòng)度(DAI)評(píng)分及結(jié)腸MPO水平呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1) CD4+CD29+T細(xì)胞及結(jié)腸VCAM-1在UC中的表達(dá)較單純濕熱證有一定特異性，可能是濕熱向UC，尤其是向濕熱UC轉(zhuǎn)變的重要促進(jìn)因素。
　　(2) CD4+CD29+T細(xì)胞與UC的疾病活動(dòng)度及嚴(yán)重程度密切相關(guān)，可能被TNF-α刺激分化，通過IL-8及VCAM-1遷移到腸道以調(diào)