水陸二仙丹治療腎病綜合征大鼠蛋白尿的作用機理研究.pdf

1、目的： 本實驗研究以祖國醫(yī)學及現代醫(yī)學理論為基礎，從血液生化學、組織病理學、分子生物學等方面探討水陸：二仙丹水提取液對阿霉素大鼠蛋白尿的影響及部分作用機制。 方法： 將Wistar雄性大鼠50只，隨機分為正常組(n=10)、模型組(n=10)、水陸二仙丹高劑量組(n=10)、水陸二仙月低劑量組(n=10)、苯那普利組(n=10)。采用阿霉素一次性尾靜脈注射法(0.6mg/100g)制作腎病綜合征模型。用藥劑量及方

2、法：正常組和模型組：0.9％生理鹽水1ml/100g體重灌胃；高劑量組：高劑量水陸二仙丹水提取液1ml/100g體重灌胃；低劑量組：低劑量水陸二仙丹水提取液1ml/100g體重灌胃；苯那普利組：苯那普利0.3mg/100g體重灌胃，上述用藥均為造模一周后開始，每日一次，療程3周。①觀察一般情況及體重，造模前、造模后第7天、給藥第7、14、21天將大鼠置于代謝籠中收集其24小時尿液，測24HUPQ；給藥第21天測尿β2-MG、ALB和Ig

3、G；②末次治療給藥后24h，摘除眼球法取血檢測Scr、Bun、 ALB、TP、TG和TCH；放射免疫法檢測TNF-α、HA；流式細胞術檢測外周血細胞CD<,44>陽性細胞數。③術次給藥24小時后，迅速處死大鼠摘除左腎，分別稱取50mg 腎組織，RT-PCR法檢測大鼠腎組織CD<,44>mRNA的表達。④末次給藥24小時后，將摘除。腎組織經處理后作超薄切片，在H-600透射電鏡下觀察；其余部分腎組織，處理后經HE及PAS染色，光鏡下觀察。

4、⑤統計學方法：全部數據采用SPSS12.0統計軟件進行分析，實驗數據以均數±標準差(Mean±SD)表示，計量資料比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD法；兩變量間相關關系采用雙變量相關分析(Spearman相關系數)。 結果： 鹽酸阿霉素尾靜脈注射后7天，造模各組大鼠 24HUPQ 較正常組顯著增加，24HUPQ均>50mg，說明腎病綜合征模型制作成功。 ①水陸二仙丹水提取液對阿霉素腎病大鼠血液生化學及尿蛋

5、白影響的研究：給藥后第7天、給藥后第14天、給藥后第21天，高、低劑量組、苯那普利組24HUPQ均顯著低于模型組(P<0.01)；高、低劑量組、苯那普利組尿ALB、尿β<,2>-MG和尿IgG定量均顯著低于模型組(P<0.01)。 給藥三周后高、低劑量組、苯那普利組大鼠血清ALB、TP檢測均顯著高于模型組 (P<0.01)；高、低劑量組大鼠血清ALB、TP檢測水平高于苯那普利組(P<0.05低劑量組P<0.01)。血脂結果顯示：

6、高、低劑量組、苯那普利組TG、CHOL含量顯著低于模型組(P<0.01)；高、低劑量組TG、CHOL水平均明顯低于苯那普利組(P<0.01)(高劑量組CHOL P<0.05)。各組間BUN、Scr水平比較無顯著性差異(P>0.05)。 說明水陸二仙丹能有效減少阿霉素腎病大鼠蛋白尿，并在改善阿霉素腎病大鼠營養(yǎng)狀況、調節(jié)蛋白質代謝及脂質代謝方面有良好作用。 ②水陸二仙丹對阿霉素腎病大鼠TNF-α、HA影響的研究：高、低劑量組

7、、苯那普利組TNF-α和HA均顯著低于模型組(P<0.01)：高、低劑量組、苯那普利組各組間TNF-α和HA無顯著性差異(P>0.05)；TNF-α、HA值與24HUPQ、尿ALB、尿β<,2>-MG和尿IgG呈正相關(P<0.01)，提示水陸二仙丹通過影響細胞因子調節(jié)網絡、減輕炎癥反應減少尿蛋白的可能機制。 ③水陸二仙丹對阿霉素腎病大鼠外周血CD<,44>陽性細胞數影響的研究：高、低劑量組、苯那普利組人鼠外周血CD<,44>陽

8、性細胞數顯著低于模型組(P<0.01)；高劑量組、低劑量組外周血CD<,44>陽性細胞數均低于苯那普利組(P<0.05)；大鼠外周血CD<,44>陽性細胞數與24HUPQ、尿ALB、尿β<,2>-MG和尿IgG呈正相關(P<0.01)，提示水陸二仙丹有降低阿霉素腎病大鼠外周血CD<,44>陽性細胞數，減輕炎癥性損害的發(fā)生，從而減少尿蛋白的作用。 ④水陸二仙丹對阿霉素腎病大鼠腎組織CD<,44>mRNA表達影響的研究：高、低劑量組

9、、苯那普利組各組大鼠。腎組織CD<,44>mRNA表達顯著低于模型組(P<0.01)；高、低劑量組、苯那普利組各組間大鼠腎組織CD<,44>mRNA表達無顯著性差異(P>0.05)；CD<,44>mRNA在腎組織的表達與24HUPQ、尿ALB、尿β<,2>-MG和尿IgG呈正相關(P<0.01)，在基因水平上說明了水陸二仙丹減少阿霉素腎病大鼠蛋白尿、阻緩腎臟炎性損傷的可能機制。 ⑤水陸二仙丹對阿霉素腎病大鼠的病理學研究：光鏡下觀

10、察，模型組可見輕度系膜增生，其它各組腎小球及腎小管光鏡下均未見明顯病理改變：透射電鏡檢測結果，提示阿霉素腎病大鼠的病理變化主要在腎小球足細胞足突廣泛融合，局部系膜細胞、基質增生及腎小管細胞周邊水腫等，尚可見內皮細胞凋亡；水陸二仙丹高劑量組，低劑量組，苯那普利組大鼠病變程度明顯較模型組輕，僅見足突部分融合。 結論： 1．本研究證明水陸二仙丹能有效降低阿霉素腎病大鼠蛋白尿，且在改善阿霉素腎病大鼠營養(yǎng)狀況、調節(jié)蛋白質代謝及脂質

11、代謝方面的良好作用。 2．水陸二仙丹治療后大鼠病理改變明顯減輕，為水陸二仙丹治療阿霉素腎病大鼠、減輕蛋白尿提供了組織病理學上的依據。 3．水陸二仙丹降低阿霉素腎病大鼠蛋白尿的機理：水陸二仙丹可降低阿霉素腎病大鼠血TNF-α、HA和外周血CD<,44>陽性細胞數，通過對功能性細胞因子-細胞粘附分子-細胞間基質成分之間這一網絡的作用，影響機體致炎及免疫功能，減輕炎癥性損害的發(fā)生，從而起到減少尿蛋白的作用。同時，通過減輕炎癥反