壁剪切力對移植靜脈內(nèi)膜增生中單核細(xì)胞募集的影響及機(jī)制探討.pdf

1、內(nèi)膜增生是臨床上靜脈移植血管旁路術(shù)后遠(yuǎn)期再狹窄最常見的病理改變。循環(huán)血液白細(xì)胞募集到血管壁，參與管壁炎性反應(yīng)是內(nèi)膜增生中早期發(fā)生、影響進(jìn)展的重要階段。單核細(xì)胞作為血管炎性病變中重要的介質(zhì)細(xì)胞而廣為關(guān)注；動脈系統(tǒng)內(nèi)膜增生及粥樣硬化病變中，血管壁剪切力對單核細(xì)胞募集作用的影響已有學(xué)者研究，但在移植靜脈內(nèi)膜增生中的作用尚未見報(bào)道。本研究首先建立并評估正常及低血流量小鼠靜脈移植模型；并應(yīng)用主要調(diào)控單核細(xì)胞募集的趨化因子受體2(CCR2)缺陷小鼠

2、，觀察內(nèi)膜增生變化及單核細(xì)胞募集情況；結(jié)合兔不同壁剪切力狀態(tài)下移植靜脈白細(xì)胞募集情況綜合分析；應(yīng)用小鼠全基因組表達(dá)譜芯片篩選不同壁剪切力和CCR2缺陷影響移植靜脈內(nèi)膜增生的差異基因，并分析壁剪切力和單核細(xì)胞募集在其中的作用。
　　 一、小鼠靜脈移植模型的建立與評估
　　 目的：建立并評估套管法小鼠正常及低血流量靜脈移植模型，觀察低壁剪切力對內(nèi)膜增生的影響。
　　 方法：應(yīng)用套管法，建立小鼠同種異體下腔靜脈一頸總動

3、脈移植模型，通過結(jié)扎頸內(nèi)動脈及枕動脈導(dǎo)致同側(cè)移植靜脈低壁剪切力狀態(tài)。檢測血流參數(shù)及術(shù)后28天內(nèi)膜增生變化情況。
　　 結(jié)果：套管法靜脈移植術(shù)操作成功率高，重復(fù)性好；同側(cè)頸動脈分支部分結(jié)扎可以降低移植靜脈平均血流量及壁剪切力達(dá)70％左右；術(shù)后28天低血流量組移植靜脈內(nèi)膜厚度較正常血流量組增加30％左右。
　　 結(jié)論：套管法小鼠靜脈移植模型應(yīng)用價(jià)值較高；低壁剪切力對移植靜脈內(nèi)膜增生有促進(jìn)作用。
　　 二、壁剪切力對小

4、鼠移植靜脈內(nèi)膜增生及單核細(xì)胞募集的影響
　　 目的：觀察不同壁剪切力狀態(tài)下CCR2缺陷對移植靜脈內(nèi)膜增生的影響，以及單核/巨噬細(xì)胞在術(shù)后7天移植靜脈壁的表達(dá)變化。
　　 方法：建立正常及低血流量小鼠靜脈移植模型，觀察CCR2基因敲除小鼠及其野生型對照在術(shù)后28天的內(nèi)膜增生差別：序列切片，F(xiàn)4/80免疫組化染色檢測術(shù)后7天移植靜脈壁單核/巨噬細(xì)胞的表達(dá)及差別。
　　 結(jié)果：CCR2缺陷不能降低正常壁剪切力狀態(tài)下移植

5、靜脈內(nèi)膜增生，但在低壁剪切力下可以降低內(nèi)膜厚度達(dá)22.8％。術(shù)后7天單核/巨噬細(xì)胞在低血流量CCR2缺陷小鼠的移植靜脈壁外層表達(dá)減少。
　　 結(jié)論：CCR2在低壁剪切力，而不是正常壁剪切力狀態(tài)下影響移植靜脈內(nèi)膜增生，并且可能是通過影響單核細(xì)胞的募集而實(shí)現(xiàn)的。
　　 三、壁剪切力對兔移植靜脈白細(xì)胞募集的影響目的：定量觀察不同壁剪切力狀態(tài)下移植靜脈早期白細(xì)胞的募集情況。方法：建立兔高、低血流量靜脈移植模型，自體部分血液白細(xì)胞

6、分離、標(biāo)記并回輸，定量觀察術(shù)后24小時(shí)標(biāo)記白細(xì)胞在內(nèi)皮表面及內(nèi)皮下的表達(dá)。結(jié)果：術(shù)后24小時(shí)低血流量側(cè)移植靜脈內(nèi)皮及內(nèi)皮下白細(xì)胞表達(dá)明顯高于同一實(shí)驗(yàn)動物高血流量側(cè)移植靜脈。結(jié)論：低壁剪切力增強(qiáng)，而高壁剪切力降低循環(huán)白細(xì)胞對移植靜脈的募集。
　　 四、小鼠靜脈移植術(shù)后早期基因表達(dá)譜及壁剪切力和MCP1-CCR2通路對其影響
　　 目的：檢測并分析小鼠移植靜脈術(shù)后7天的全基因組表達(dá)譜，及低壁剪切力和CCR2缺陷對其的影響。<

7、br>　　 方法：應(yīng)用Agilent44k小鼠全基因寡核苷酸芯片，檢測C57BL/6J和CCR2基因敲除小鼠的下腔靜脈、C57BL/6J正常血流量和低血流量移植術(shù)后7天靜脈、CCR2基因敲除小鼠低血流量移植術(shù)后7天靜脈的基因表達(dá)譜，篩選差異表達(dá)基因，行數(shù)據(jù)發(fā)掘及分析；觀察CCR2及其配體-單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)1的基因表達(dá)情況，并行定量PCR驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：CCR2及MCP-1基因在術(shù)后7天小鼠移植靜脈中表達(dá)上調(diào)；CX