經(jīng)典型瞬時感受器電位通道在鼻息肉中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、鼻息肉(nasal polyps)是上呼吸道常見疾病，發(fā)病率約為1-2％?，F(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)鼻息肉的病理生理基礎(chǔ)是重度鼻粘膜組織水腫和慢性炎癥反應(yīng)，但其具體機(jī)制至今仍未闡明。
　　 近年來人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)鈣離子在免疫細(xì)胞的活化、增殖、分泌細(xì)胞因子和脫顆粒反應(yīng)等功能中起關(guān)鍵作用，但是其具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚未清楚。經(jīng)典型瞬時感受器電位（canonical transient receptor potential，TRPC）通道是果蠅TRP蛋白的

2、哺乳動物同系物。TRPC通道能被IP3激活而產(chǎn)生持續(xù)的鈣內(nèi)流。研究發(fā)現(xiàn)TRPC通道表達(dá)于中性粒細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞，介導(dǎo)免疫細(xì)胞鈣庫操縱性鈣內(nèi)流機(jī)制;而在TRPC6敲基因鼠研究發(fā)現(xiàn)TRPC6的缺失減少了由卵清蛋白激發(fā)的支氣管嗜酸性細(xì)胞數(shù)量。然而TRPC通道在鼻息肉發(fā)生發(fā)展中的的作用及分子機(jī)制尚未深入研究。因此我們提出如下假說:鼻息肉組織中TRPC通道以TRPC5通道表達(dá)增高為主，高表達(dá)的TRPC5通道可能通過激活NF-

3、κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路增加嗜酸性粒細(xì)胞浸潤和致炎介質(zhì)的增加，從而在鼻息肉的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。
　　 目的:
　　 1.觀察鼻息肉組織中經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道家族表達(dá)情況;
　　 2.探討經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道與鼻息肉嗜酸性粒細(xì)胞浸潤和炎癥反應(yīng)的關(guān)系;
　　 3.探討經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道與核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.鼻息肉患者的入選及標(biāo)本收集:從201

4、1年5月至2011年12月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院耳鼻咽喉科隨機(jī)收集行息肉切除術(shù)患者58例和接受鼻中隔偏曲矯正術(shù)的患者的下鼻甲黏膜35例做正常對照。
　　 2.應(yīng)用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real time RT-PCR)檢測鼻息肉患者組織中經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道m(xù)RNA表達(dá)水平。
　　 3.應(yīng)用病理組織學(xué)和免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測鼻息肉組織標(biāo)本中經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道的分布和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量，分析它們之間的關(guān)系。

5、
　　 4.應(yīng)用蛋白免疫印跡（Western Blot）技術(shù)檢測鼻息肉患者組織中經(jīng)典型瞬時型感受器電位通道的蛋白表達(dá)、炎癥因子IL-6和核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB表達(dá)，分析他們之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 2.1一般臨床資料分析
　　 鼻息肉患者和鼻中隔偏曲患者在年齡和性別方面無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 2.2 TRPC通道m(xù)RNA和蛋白表達(dá)水平
　　 鼻息肉組織中TRPC5通道m(xù)

6、RNA表達(dá)水平明顯高于正常對照組(P＜0.05)，其他成員表達(dá)變化不明顯。鼻息肉組織TRPC5通道蛋白表達(dá)水平明顯高于對照組（P＜0.05）。
　　 2.3鼻息肉組織中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量
　　 嗜酸性粒細(xì)胞在HE染色成明顯的嗜伊紅特性，顯示為胞漿內(nèi)呈反光強(qiáng)的鮮紅色。鼻息肉組織中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量明顯高于正常鼻甲粘膜(P＜0.01)。
　　 2.4鼻息肉組織IL-6的蛋白表達(dá)水平
　　 鼻息肉患者IL-6蛋白表

7、達(dá)水平明顯高于正常鼻甲粘膜(P＜0.05)。免疫組化顯示鼻息肉組織中IL-6蛋白陽性產(chǎn)物主要位于細(xì)胞漿和細(xì)胞間質(zhì)，陽性區(qū)域所占面積也明顯增高（P＜0.05）。
　　 2.5鼻息肉組織NF-κB的蛋白表達(dá)水平
　　 Western blot結(jié)果顯示:鼻息肉組織NF-κB的非活性形式p65表達(dá)量與正常鼻甲粘膜無顯著差別(P＞0.05)，但是NF-κB的活性形式磷酸化水平的p65(p-p65)表達(dá)量比正常鼻黏膜顯著增高(P＜0

8、.05)。
　　 2.6 TRPC通道表達(dá)量與鼻息肉組織中各項指標(biāo)的相關(guān)分析
　　 鼻息肉組織中TRPC5通道表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量、致炎因子IL-6表達(dá)量和NF-κB的活性形式p-p65表達(dá)量成正相關(guān)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1.鼻息肉組織中TRPC5通道表達(dá)增高;
　　 2.高表達(dá)的TRPC5通道可能通過激活NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路增加嗜酸性粒細(xì)胞浸潤和IL-6的表達(dá)，從而在鼻