中醫(yī)不同體質(zhì)類型與HLA-II類基因相關(guān)性研究.pdf

1、該文對(duì)中醫(yī)體質(zhì)學(xué)說(shuō)的七種不同體質(zhì)類型進(jìn)行了HLA-Ⅱ類基因多態(tài)性分布研究,首先按照中醫(yī)四診合參原則,制訂體質(zhì)調(diào)查表,然后在廣東漢族人群中隨機(jī)選擇一般體檢無(wú)陽(yáng)性病變?nèi)巳鹤鳛閷?shí)驗(yàn)對(duì)象,各體質(zhì)類型收入100余例,應(yīng)用PCR-SBT方法進(jìn)行HLA-DPB1,HLA-DRB1,HLA-DQB1的基因擴(kuò)增與分型,根據(jù)得到的不同體質(zhì)類型的不同基因分型數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.結(jié)果顯示,DPB1與中醫(yī)體質(zhì)關(guān)聯(lián)很小,而DR、DQ與之關(guān)聯(lián)較大.綜合來(lái)說(shuō),陰虛質(zhì)與

2、DPB1*0501、DPB1*02012、DRB1*13021、DQB1*06011-06013、DQB1*03032、DQB1*06041、DQB1*0609關(guān)聯(lián);氣虛質(zhì)與DRB1*11011、DQB1*03032、DQB1*06041關(guān)聯(lián);濕熱質(zhì)與DRB1*11011、DRB1*13021、DQB1*06041、DQB1*0609、DQB1*05011關(guān)聯(lián);陽(yáng)虛質(zhì)與DRB1*11011、DRB1*13021、DQB1*06041關(guān)聯(lián)

3、;瘀血質(zhì)與DRB1*15011、DRB1*04051、DRB1*1405、DRB1*14071、DQB1*05021、DQB1*03032關(guān)聯(lián);痰濕質(zhì)與DRB1*09012、DRB1*11011、DQB1*03032、DQB1*05011關(guān)聯(lián).在對(duì)樣品DPB1測(cè)序分型的過(guò)程中,我們發(fā)現(xiàn)DPB1不明確雜合子的問(wèn)題非常嚴(yán)重,直接影響到結(jié)果的分型統(tǒng)計(jì).在946例樣品中,結(jié)果呈不明確雜合子的總共353例,共計(jì)30種類型,占樣品總數(shù)比率高達(dá)37％

4、.為了快速而有效的解決這個(gè)問(wèn)題,該文設(shè)計(jì)出一套SSP分型解決方案.該方法采用6條上游引物與15條下游引物,使用同一套擴(kuò)增體系與兩套循環(huán)反應(yīng)條件,只需一次PCR擴(kuò)增,就可以很方便快捷的準(zhǔn)確分辨出樣品的基因型.另外在這些樣品中,有3個(gè)樣品的測(cè)序結(jié)果,與現(xiàn)有的多態(tài)性數(shù)據(jù)庫(kù)無(wú)法匹配.經(jīng)過(guò)克隆驗(yàn)證,它們是未曾發(fā)現(xiàn)過(guò)的新HLA等位基因.這3個(gè)基因前兩個(gè)已經(jīng)向WHO命名委員會(huì)提交并獲得命名,分別為HLA-DRB1*0449,HLA-DPB1*0102

5、,第三個(gè)已向GeneBank提交,獲得注冊(cè)號(hào)AY619719,基因命名正在申請(qǐng)中.與HLA-DRB1*0449最相近的是HLA-DRB1*0406.兩者堿基序列幾乎完全相同,只是HLA-DRB1*0449第二外顯子第18位堿基由G變?yōu)锳.它導(dǎo)致了成熟蛋白分子DR β鏈11位氨基酸殘基由V(Val,頡氨酸)變成Ⅰ(Ile,異亮氨酸).而DPB1*0202與DPB1*0102最為相似,只有一個(gè)堿基的區(qū)別(第二外顯子192位由G替換成A).這