幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1在膽囊癌中的作用機(jī)制.pdf

1、本文從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 CHI3L1蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)及其臨床意義
　　目的:研究檢測CHI3L1蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)，研究其與臨床病理因素間的關(guān)系及其對膽囊癌預(yù)后的影響。
　　方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測65例膽囊癌組織標(biāo)本及20例慢性膽囊炎膽囊粘膜組織標(biāo)本中CHI3L1蛋白表達(dá)情況，結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析，CHI3L1蛋白表達(dá)陽性組與陰性組生存分析用Kaplan-Meier法，組間分析用

2、log-rank檢驗(yàn)，CHI3L1蛋白在膽囊癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性采用卡方檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:CHI3L1在膽囊癌組織中高表達(dá)，胞漿內(nèi)染色，陽性率為87.7％，CHI3L1蛋白在慢性膽囊炎膽囊粘膜上皮弱表達(dá)，胞漿染色，胞核未見染色，陽性率為11.1％。膽囊癌臨床病理因素的關(guān)系分析顯示，CHI3L1蛋白表達(dá)與腫瘤生長方式、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。生存分析表明膽囊癌

3、中晚期患者中CHI3L1蛋白表達(dá)陽性者生存時間明顯短于CHI3L1蛋白表達(dá)陰性者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:CHI3L1在膽囊癌組織中存在較高的表達(dá)。CHI3L1的表達(dá)與膽囊癌分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。CHI3L1表達(dá)陽性的膽囊癌患者術(shù)后生存時間短于CHI3L1陰性患者。
　　第二部分 RNAi抑制CHI3L1表達(dá)對體外培養(yǎng)的膽囊癌細(xì)胞的影響
　　第一節(jié) CHI3L1基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建

4、>　　目的:探討siRNA-CHI3L1對人膽囊癌細(xì)胞株CHI3L1基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:通過慢病毒感染膽囊癌細(xì)胞GBC-SD，siRNA-CHI3L1沉默CHI3L1基因后，應(yīng)用RT-PCR，Western-blot檢測人膽囊癌細(xì)胞GBC-SD的CHI3L1 mRNA及其蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:siRNA-CHI3L1作用于人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD后，CHI3L1mRNA表達(dá)顯著下調(diào)，明顯抑制CHI3L1

5、蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論:靶向CHI3L1基因的RNAi慢病毒載體構(gòu)建成功
　　第二節(jié) CHI3L1基因沉默對膽囊癌GBC-SD細(xì)胞株生物學(xué)特性的影響
　　目的:研究siRNA干擾沉默CHI3L1基因?qū)θ四懩野┘?xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響。
　　方法:膽囊癌細(xì)胞GBC-SD分為3組:GBC-SD、陰性對照組GBC-SD(siRNA-NC)及干擾組GBC-SD(siRNA-CHI3L1)。CCK-8法檢測3組細(xì)胞增殖能力

6、;Transwell小室運(yùn)動侵襲試驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力;Elisa法檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞上清液中的MMP-9變化。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染前后3組細(xì)胞進(jìn)行比較，GBC-SD(siRNA-CHI3L1)較GBC-SD增殖能力、細(xì)胞遷移能力、細(xì)胞侵襲能力下降(P＜0.05)。Elisa檢測上清液示GBC-SD（siRNA-CHI3L1）較GBC-SD相比，MMP-9分泌減少(p＜0.05)。
　　結(jié)論:CHIL31蛋白可以促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞

7、的增殖、遷移、侵襲能力，并促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞分泌MMP-9。siRNA干擾沉默CHI3L1基因后可明顯抑制CHI3L1所致的這些作用。
　　第三部分 CHI3L1基因在膽囊癌細(xì)胞GBC-SD信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的作用
　　目的:研究膽囊癌細(xì)胞GBC-SD CHI3L1蛋白細(xì)胞信號通路的情況;
　　方法:膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD、GBC-SD(siRNA-CHI3L1)及GBC-SD(siRNA-NC)，提取細(xì)胞蛋白，Wester

8、n-Blot法檢測比較細(xì)胞中ERK1/ERK2及JNK的信號通路的激活情況;GBC-SD加入ERK信號通路阻斷劑(U0126)觀察對其遷移和侵襲能力的影響;RT-PCR檢測3組細(xì)胞分泌MCP-1和IL-8情況;
　　結(jié)果:GBC-SD與GBC-SD（siRNA-NC）之間ERK1/ERK2及JNK磷酸化含量無明顯差別，GBC-SD（siRNA-CHI3L1）ERK1/ERK2及JNK活化明顯減少(P＜0.05); GBC-SD加入