清熱涼血祛風通絡(luò)法對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的實驗研究.pdf

1、目的：類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種累及關(guān)節(jié)為主的炎性自身免疫性疾病。清熱涼血祛風通絡(luò)法是導(dǎo)師邱明義教授治療類風濕關(guān)節(jié)炎的常用方法，本課題擬從文獻整理和實驗研究探討清熱涼血祛風通絡(luò)法對類風濕關(guān)節(jié)炎的作用機理。實驗研究是以佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA)作為RA的動物模型，觀察清熱涼血祛風通絡(luò)法對AA大鼠T淋巴細胞亞群水平、相關(guān)細胞因子TNF-α、IL-1β以及CD4+CD25+Tregs水平的影響,旨在探討清熱涼血祛風通絡(luò)法對該動物模型的作用機制，為臨

2、床治療RA提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.理論研究：采用文獻分析法，歸納中醫(yī)對類風濕關(guān)節(jié)炎的病因病機及診治的研究，為實驗方治療類風濕關(guān)節(jié)炎提供理論依據(jù)。
　　2.實驗研究
　?、倌Ｐ椭谱骱徒o藥：按照隨機分組方法將32只SPF級SD大鼠分為空白組（A組）、模型組（B組）、清熱涼血祛風通絡(luò)法組（C組）、尪痹顆粒對照組（D組）。參照文獻方法，除空白組外，其余各組均于大鼠右后足底部皮下注射完全弗氏佐劑0.15ml/只

3、，空白組以同樣方法注射生理鹽水0.15ml/只。造模7d后，清熱涼血祛風通絡(luò)法組給予中藥實驗方混濁液29g/（kg·d）灌胃，尪痹顆粒對照組給予尪痹顆粒混懸液1.88g/（kg·d）灌胃，空白組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃3W,每天1次。
　　②觀察AA大鼠一般情況，測量大鼠體重、足跖腫脹度、評估關(guān)節(jié)炎指數(shù)。
　?、蹤z測外周血 T淋巴細胞亞群、相關(guān)細胞因子 TNF-α、IL-1β、CD4+CD25+Tregs水平

4、。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1.理論研究：研究發(fā)現(xiàn)本虛標實,寒熱錯雜,瘀熱痹阻為類風濕關(guān)節(jié)炎主要病機特點。隨著疾病向緩解期的發(fā)展，“久病必瘀”、“久病入絡(luò)”,虛實互見、寒熱錯雜的病機逐漸出現(xiàn),在病邪反復(fù)作用下易產(chǎn)生痰濁、瘀血、熱毒等病理產(chǎn)物,深入臟腑,傷及氣血陰陽,表現(xiàn)為病勢纏綿難愈。故以此為依據(jù)確立清熱涼血祛風通絡(luò)法。
　　2.實驗研究
　?、僖话闱闆r：除空白組外，其余各組大鼠造模

5、6h后出現(xiàn)局限于注射足的腫脹，24h后達到高峰，持續(xù)3d，7-8d后出現(xiàn)累及膝關(guān)節(jié)的病變，皮膚出現(xiàn)潰瘍，并有舔足，跛行，拖腿現(xiàn)象，對外界刺激反應(yīng)低，精神萎靡，飲食、活動減少，便質(zhì)稀溏，毛發(fā)干枯。繼發(fā)病變于致炎后12d左右出現(xiàn)，表現(xiàn)為大鼠出現(xiàn)四肢對稱性趾間關(guān)節(jié)腫脹，左側(cè)后足先發(fā)病，5-7d后擴展到前足跖趾關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)，并逐漸加重。模型組大鼠精神萎靡，飲食活動減少，便質(zhì)稀溏，毛發(fā)干枯，后期有明顯的活動障礙。經(jīng)治療后，清熱涼血祛風通絡(luò)法組和尪

6、痹顆粒對照組經(jīng)治療后大鼠精神、飲食、活動等狀況總體上優(yōu)于模型組。
　　②體重、足跖腫脹度及關(guān)節(jié)炎指數(shù)變化情況：各組大鼠在同一治療階段的體重均值差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在造模后至治療結(jié)束過程中體重呈現(xiàn)為一個上升趨勢。與空白組比較，其余各組大鼠的足跖腫脹度在同一治療階段均有統(tǒng)計學(xué)意義，腫脹度明顯大于空白組。用藥2w后清熱涼血祛風通絡(luò)法組腫脹明顯減輕，與模型組比較差異有顯著性。與空白組比較，其余各組大鼠造模7d后大鼠表現(xiàn)為不同程度的關(guān)節(jié)炎癥，

7、關(guān)節(jié)炎指數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　?、弁庵苎猅淋巴細胞亞群(CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細胞)百分比以及CD4+/CD8+的比值變化情況：與空白組比較，模型組CD4+T淋巴細胞水平升高、CD8+T淋巴細胞水平降低、CD4+/CD8+的比值升高，差異均有顯著性。與模型組比較，清熱涼血祛風通絡(luò)法組能降低CD4+T淋巴細胞水平；能升高CD8+T淋巴細胞水平；能降低CD4+/CD8+的比值，差異均有顯著性。
　?、芡庵苎?/p>

8、清中細胞因子TNF-α及IL-1β水平變化情況：模型組TNF-α、IL-1β細胞因子水平均升高，與空白組比較，差異有顯著性。與模型組比較，清熱涼血祛風通絡(luò)法組能降低細胞因子TNF-α、IL-1β水平，差異有顯著性。
　　⑤外周血CD4+CD25+Tregs細胞百分比變化情況：模型組CD4+CD25+Tregs百分比明顯降低，與空白組比較，有顯著差異性。清熱涼血祛風通絡(luò)法組能升高CD4+CD25+Tregs細胞水平，與模型組比較，差

9、異有顯著性。
　　結(jié)論：
　　1.清熱涼血祛風通絡(luò)法能改善AA一般情況,抑制AA鼠的足跖腫脹及關(guān)節(jié)炎指數(shù)，控制炎癥的發(fā)展，減輕大鼠關(guān)節(jié)炎引起的病理損傷。
　　2.清熱涼血祛風通絡(luò)法能降低 AA大鼠 CD3+CD4+淋巴細胞水平，升高CD3+CD8+淋巴細胞水平，降低 CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值，調(diào)節(jié)紊亂的T淋巴細胞亞群，從而改善免疫損傷，可能是其有效治療類風濕關(guān)節(jié)炎的主要作用機理。
　　3.清熱涼血