復(fù)方莪術(shù)散調(diào)控子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型細(xì)胞周期蛋白E(Cyclin E)及P27的表達(dá).pdf

1、目的：探討細(xì)胞周期素E與P27蛋白在大鼠子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義；觀察復(fù)方莪術(shù)散對細(xì)胞周期蛋白E(Cyclin E)及P27在子宮內(nèi)膜異位癥大鼠異位內(nèi)膜表達(dá)的影響，從細(xì)胞周期調(diào)控的角度探討復(fù)方莪術(shù)散治療子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　1.選取健康成熟未交配的清潔級雌性Wistar大鼠60只，每只體重均在(200士20)g，不檢測其動情期，采用自體移植法建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型，測量其移植物大小，觀察其形態(tài)。

2、建模4周后二次剖腹，根據(jù)模型情況選擇納入與排除，將成膜無差別的大鼠隨機(jī)分為4組：復(fù)方莪術(shù)散高劑量組，復(fù)方莪術(shù)散低劑量組，孕三烯酮組及模型觀察組，同時設(shè)置正常大鼠在位內(nèi)膜為空白對照組。
　　2.分別給藥4周后，于末次給藥24小時內(nèi)，腹腔麻醉大鼠，第三次剖腹，檢測移植物體積和重量，剝離種植的異位病灶及相應(yīng)的一段在位子宮內(nèi)膜制作標(biāo)本，進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察其病理組織形態(tài)。
　　3.免疫組織化學(xué)方法(SP法)測定CyclinE和P

3、27蛋白在大鼠復(fù)方莪術(shù)散組、孕三烯酮組、模型觀察組及空白對照組不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.不檢測動情期造模4周后，第二次剖腹證實，采用自體移植法復(fù)制 EMs大鼠模型，其成模率為84.1％。生長良好的異位病灶表現(xiàn)：隆起的囊泡狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)部可見大量積液，豐富血管走行于病灶表面。病理學(xué)檢查：子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞、腺體和間質(zhì)組織生長。
　　2.造模4周后，模型觀察組移植內(nèi)膜體積較大，腹腔粘連嚴(yán)重。復(fù)方莪術(shù)散(EZ

4、P)干預(yù)后體積明顯減小，腹腔粘連減輕。用藥前各組大鼠異位病灶體積比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；分組給藥4周后，第三次剖腹發(fā)現(xiàn)模型觀察組異位病灶體積較造模4周時明顯增大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，EZP高劑量組異位病灶體積與模型觀察組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；EZP低劑量組異位病灶體積與模型觀察組相比，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；孕三烯酮組異位病灶體積與模型觀察組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）

5、；EZP高劑量組與孕三烯酮組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.分組給藥4周后，EZP高劑量組異位病灶重量與模型觀察組相比明顯減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與孕三烯酮組異位病灶重量比較，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；EZP低劑量組異位病灶重量與模型觀察組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　4.從組織形態(tài)學(xué)來看，光鏡下觀察模型觀察組、EZP各劑量組及孕三烯酮組移植的子宮內(nèi)膜組織均成活，形成

6、的囊壁由內(nèi)向外分別為上皮層、粘膜層及少量纖維結(jié)締組織。模型觀察組異位內(nèi)膜上皮層呈高柱狀，粘膜層內(nèi)間質(zhì)致密，血管豐富，腺體數(shù)量較多，擴(kuò)張狀，腺腔大。相對于模型觀察組，各給藥組可見不同程度萎縮的異位內(nèi)膜組織，腺體面積縮小，數(shù)量減少?？梢娮儽〉谋桓采掀??？梢姷椭鶢钆c扁平狀的上皮細(xì)胞，呈松散排列。間質(zhì)細(xì)胞明顯減少，血管數(shù)目減少。與正常大鼠子宮內(nèi)膜相比， EZP組在位內(nèi)膜的腺體數(shù)量、面積及腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)并無明顯改變。
　　5.免

7、疫組化技術(shù)檢測CyclinE蛋白陽性表達(dá)主要位于子宮內(nèi)膜細(xì)胞核上，在模型觀察組中異位、在位子宮內(nèi)膜及空白對照組子宮內(nèi)膜中均可檢測到 CyclinE蛋白表達(dá)。CyclinE在模型觀察組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（88.9%）較其在空白對照組（在位子宮內(nèi)膜）中（10%）明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CyclinE在EZP高劑量組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（22.2%）、在孕三烯酮組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率(33.

8、3%)較其在模型觀察組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（88.9%）明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CyclinE在低劑量組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（60%）較其在模型觀察組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（88.9%）降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6.免疫組化技術(shù)檢測 P27蛋白陽性表達(dá)主要位于子宮內(nèi)膜細(xì)胞核上，在模型對照組中異位、在位子宮內(nèi)膜及空白對照組子宮內(nèi)膜中均可檢測到P27蛋白表達(dá)。P27

9、在模型觀察組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（22.2%）較其在空白對照組（在位子宮內(nèi)膜）中（80%）明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；P27在 EZP高劑量組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（77.8%）、在孕三烯酮組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率(77.8%)較其在模型觀察組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（22.2%）明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；P27在低劑量組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（40%）較其在模型

10、觀察組（異位子宮內(nèi)膜）中其陽性表達(dá)率（22.2%）有所升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　7.細(xì)胞周期素E與P27蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥組中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.復(fù)方莪術(shù)散可抑制大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展，減小移植物體積和重量。促進(jìn)異位病灶的萎縮吸收，減輕腹腔粘連，改善異位內(nèi)膜組織的病理變化，其中以復(fù)方莪術(shù)散高劑量組最為明顯，對在位內(nèi)膜組織無明顯影響。
　　2.大鼠異位內(nèi)膜

11、組織中CyclinE高表達(dá)與P27低表達(dá)，與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，CyclinE和P27在異位內(nèi)膜組中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，說明兩者具有反向協(xié)同作用，表明單一的CyclinE高表達(dá)或者 P27低表達(dá)，可能不足以導(dǎo)致內(nèi)異癥的發(fā)生，而需要兩者協(xié)同或者其他更多基因的共同作用。
　　3.復(fù)方莪術(shù)散能夠下調(diào)CyclinE在大鼠異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)，升高P27的表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞周期，使得異位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖與存活受到限制從而使病灶萎縮。因此