抑郁癥遺傳模式及其與CREB1、BDNF基因的關(guān)聯(lián)和表達(dá)研究.pdf

1、第一部分首發(fā)抑郁癥遺傳效應(yīng)及遺傳模式的初步研究 目的:探討首發(fā)抑郁癥的遺傳效應(yīng)及遺傳模式。 方法:采用嚴(yán)格的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)107例首次發(fā)作的抑郁癥患者即先證者進(jìn)行詳細(xì)的家族史調(diào)查，調(diào)查范圍包括先證者的一至三級(jí)親屬共4439人，詢問親屬中各種精神疾病的患病情況，繪制家系圖。(1)對(duì)曾經(jīng)明確診斷或疑似有精神疾病的親屬逐個(gè)面檢或由知情者描述病情，根據(jù)DSM-IV診斷標(biāo)準(zhǔn)做出診斷，然后計(jì)算各種精神疾病尤其是抑郁癥的患病率。(

2、2)采用醫(yī)學(xué)遺傳數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法分離分析中的χ2測(cè)驗(yàn)法和子女總數(shù)校正法，以及多基因遺傳的Falconer閾值模式分析，初步探討首發(fā)抑郁癥的遺傳模式。 結(jié)果:(1)先證者中，有各種精神疾病家族史者占42．99％(46例)，有抑郁癥家族史者占26．17％(28例)，占所有有陽性家族史者的60．87％(28例／46例)。(2)一至三級(jí)親屬中抑郁癥的患病率為0．87％(29例)，顯著高于群體患病率(0．02％，P<0．01)；其中女性的患病

3、率(136％)顯著高于男性(0．41％，P<0．01)。一、二、三級(jí)親屬抑郁癥的患病率分別為7．46％、0．37％和0．05％，與群體患病率比較，前兩者分別有非常顯著性差異(P<0．01)和顯著性差異(P<0．05)，后者無顯著性差異(P>0．05)；各級(jí)親屬中女性的患病率均高于男性，其中一級(jí)親屬女性患病率為16．12％，男性患病率為8．44％，有非常顯著性差異(P

4、有非常顯著性意義(P<0．001)，提示首發(fā)抑郁癥不符合常染色體顯性遺傳；采用子女總數(shù)校正法校正后的分離率為0．20，與隱性遺傳的分離率0．25比較，差異無顯著性意義(P>0．05)，表明符合常染色體隱性遺傳模式。(4)多基因閾值模式分析發(fā)現(xiàn)，加權(quán)平均遺傳率及標(biāo)準(zhǔn)誤為(109．73±5．26)％，計(jì)算得出一、二、三級(jí)親屬的預(yù)期患病率分別為7．20％、0．62％和0．13％，經(jīng)吻合度檢驗(yàn)與實(shí)際患病率(分別為7．46％、0．37％和0．05

5、％)的差異均無顯著性意義(P均>0．05)，表明遺傳模式可能為多基因遺傳，由于遺傳率超過100％，提示可能存在主基因效應(yīng)，加之由同胞患病率估計(jì)的遺傳率高于由父母患病率估計(jì)的遺傳率，故推測(cè)存在隱性主基因。 結(jié)論:(1)首發(fā)抑郁癥具有明顯的遺傳效應(yīng)，與患者血緣關(guān)系越近，患病率越高；(2)首發(fā)抑郁癥可能符合具有隱性主基因效應(yīng)的多基因遺傳模式。 第二部分 抑郁癥與cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白CREBl基因的關(guān)聯(lián)和表達(dá)研究

6、 目的:探討cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cyclicAMPresponseelement-bindingprotein，CREBl)基因與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系。研究抑郁癥患者和健康對(duì)照外周血白細(xì)胞中CREBl基因的表達(dá)水平，探討該基因與抑郁癥的關(guān)系以及抗抑郁藥治療對(duì)基因表達(dá)水平的影響。 方法:(1)收集105個(gè)抑郁癥核心家系，均抽取外周靜脈全血，提取基因組DNA。采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性．聚合酶鏈反應(yīng)(RFLP-PCR)方法對(duì)CR

7、EBl基因上的兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms，SNP)rsl0932201和rs6740584進(jìn)行基因分型。計(jì)算每個(gè)SNP位點(diǎn)的等位基因及基因型頻率。采用ETDT軟件進(jìn)行單個(gè)位點(diǎn)的傳遞／不平衡檢驗(yàn)(transmissiondisequilibriumtest，TDT)來分析每個(gè)SNP與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系，采用EMLD程序分析成對(duì)SNP之間的連鎖不平衡(1inkagedisequilibriu

8、m，LD)。最后應(yīng)用TRANSMIT2．5．2軟件進(jìn)行多個(gè)位點(diǎn)的單體型TDT分析，以探討CREBl基因單體型與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系。(2)采集36例首次發(fā)作未服用任何抗抑郁藥的抑郁癥患者、15例抗抑郁藥治療滿12周后的抑郁癥患者及44例健康對(duì)照的新鮮外周血1．5ml，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA。在ABI7900型實(shí)時(shí)定量PCR儀上，采用TaqManMGB探針法對(duì)抑郁癥患者與健康對(duì)照的CREBl基因表達(dá)水平進(jìn)行相對(duì)定量，以管家基因GAPD

9、H作為內(nèi)對(duì)照基因來標(biāo)化CREBl基因的表達(dá)水平，繪制CREBl基因和內(nèi)對(duì)照基因兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線來測(cè)定待測(cè)樣本中CREBl基因的起始拷貝數(shù)。比較抑郁癥患者與健康對(duì)照、及抑郁癥患者治療前后的基因表達(dá)水平。根據(jù)性別、發(fā)病年齡、HAMD-24和HAMA量表評(píng)分等將治療前36例患者分為不同的亞組，評(píng)估CREBl基因表達(dá)水平與性別、發(fā)病年齡、抑郁癥狀嚴(yán)重程度、抑郁癥狀各因子、焦慮癥狀及抗抑郁藥治療療效之間的關(guān)系。 結(jié)論:(1)CREBl基因上r

10、sl0932201和rs6740584兩個(gè)SNP位點(diǎn)與抑郁癥均無關(guān)聯(lián)，但由這兩個(gè)SNP位點(diǎn)構(gòu)成的單體型與抑郁癥存在強(qiáng)陽性關(guān)聯(lián)，表明CREBl基因rsl0932201一rs6740584單體型可能在抑郁癥的遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制中起重要作用，CREBl基因可能是抑郁癥的易感基因。(2)抑郁癥患者外周血的CREBl基因表達(dá)水平與健康對(duì)照無顯著性差異，與性別、發(fā)病年齡、臨床癥狀群無關(guān)，而且抗抑郁藥治療對(duì)外周血CREBl基因的表達(dá)水平無顯著影響。

11、 第三部分抑郁癥與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF基因的關(guān)聯(lián)研究 目的:探討腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF)基因與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系。 方法:收集105個(gè)抑郁癥核心家系，均抽取外周靜脈全血，提取基因組DNA，采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性．聚合酶鏈反應(yīng)(RFLP-PCR)方法對(duì)BDNF基因上的三個(gè)單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms，

12、SNP)rs6265、rsl0835210和rs2030324進(jìn)行基因分型。計(jì)算每個(gè)SNP位點(diǎn)的等位基因及基因型頻率。采用ETDT軟件進(jìn)行單個(gè)位點(diǎn)的傳遞／不平衡檢驗(yàn)(transmissiondisequilibriumtest，TDT)來分析每個(gè)SNP與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系，采用EMLD程序分析成對(duì)SNP之間的連鎖不平衡(1inkagedisequilibrium，LD)，并應(yīng)用GOLD程序作圖。最后應(yīng)用TRANSMIT2．5．2軟件進(jìn)行多

13、個(gè)位點(diǎn)單體型的TDT分析，以探討B(tài)DNF基因上由單個(gè)SNP構(gòu)成的單體型與抑郁癥的關(guān)聯(lián)關(guān)系。 結(jié)果:(1)單個(gè)SNP位點(diǎn)的TDT分析結(jié)果顯示，BDNF基因上rs6265、rsl0835210和rs2030324三個(gè)SNP位點(diǎn)與抑郁癥均無陽性關(guān)聯(lián)，TDTχ2值為0．374(P=0．5408)、0．474(P=0．4913)和0．000(P=1．0000)。(2)應(yīng)用EMLD程序分析三個(gè)SNP位點(diǎn)rs6265、rsl08352lO和r

14、s2030324兩兩之間的LD，結(jié)果發(fā)現(xiàn)rs6265-rsl0835210和rs6265-rs2030324均存在LD(D’值分別為0．447和0．669)，rsl0835210-rs2030324則存在強(qiáng)的LD(D’值為0．922)，表明rs6265、rsl0835210和rs2030324位于一個(gè)SNP單體型上。(3)單體型TDT分析結(jié)果顯示，由BDNF基因rs6265、rsl0835210和rs2030324三個(gè)SNP位點(diǎn)構(gòu)成的單