殼寡糖和梔子苷體外抗氧化及炎癥損傷的保護(hù)機(jī)制.pdf

1、天然產(chǎn)物因資源豐富，成本低廉，使用方便，毒副作用小而普遍被用于醫(yī)療保健，系統(tǒng)研究天然產(chǎn)物的抗氧化及抗炎作用具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。殼寡糖（COS）來源于蟹殼，水溶性好，安全無毒、易被吸收，且作為食品添加劑被廣泛使用；梔子是藥食兩用傳統(tǒng)中藥，其中梔子苷（GE）含量最高，在梔子的藥用效果中起重要作用。本課題選用這兩種天然產(chǎn)物通過其抗氧化、抗炎作用為主要研究內(nèi)容，對其潛在的治病防病機(jī)制進(jìn)行深入探討，以期為今后可能的臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。
　

2、　 小膠質(zhì)細(xì)胞最為一種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞均勻的分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，當(dāng)其受到外界炎癥因子的刺激時可以被活化?；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞能產(chǎn)生活性氧族物質(zhì)，導(dǎo)致神經(jīng)損傷和變性，從而導(dǎo)致老年性神經(jīng)退行性疾病，例如阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）和帕金森癥（Parkinson’s disease，PD）等。而人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）作為血管的第一道防線，對血液中的炎癥刺激非常敏感，容易造成內(nèi)皮損傷，從而引發(fā)動脈粥樣硬化（AS

3、）等病變。這也是老年人群易感疾病。因此，從天然產(chǎn)物中尋找活性成分防止此類疾病的發(fā)生、發(fā)展已成為當(dāng)務(wù)之急。
　　 本課題從體外和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)了殼寡糖具有良好的抗氧化作用，并對炎性損傷的N9小膠質(zhì)細(xì)胞的活化具有保護(hù)作用；對其機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)殼寡糖主要是通過抑制細(xì)胞內(nèi)NO和ROS的產(chǎn)生達(dá)到防止細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用。此外，還探討了梔子苷對HUVEC炎性損傷的保護(hù)作用和分子機(jī)制，以梔子苷對細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）的調(diào)控為核心，運(yùn)用分子

4、生物學(xué)技術(shù)檢測炎癥損傷后的細(xì)胞所發(fā)生的改變，證明梔子苷對L2S誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞中ICAM-1表達(dá)升高有抑制作用，其分子機(jī)制研究表明梔子苷對LPS誘導(dǎo)的炎癥損傷的保護(hù)作用與MAPK/NF-κB信號通路密切相關(guān)。
　　 第一部分殼寡糖對自由基的清除及對N9小膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用
　　 目的：探索殼寡糖（chitool igosaccharide，COS）的抗氧化作用及其對脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS

5、）損傷N9小膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　 方法：首先在細(xì)胞外檢測COS對DPPH自由基、H2O2和羥自由基的清除作用；然后采用LPS誘導(dǎo)建立體外培養(yǎng)N9小膠質(zhì)細(xì)胞活化模型，將細(xì)胞分為正常對照組、LPS模型組、LPS+COS給藥組（COS濃度分別為50、100、200、300、400μg/mL）。觀察各組細(xì)胞的形態(tài)；檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)液中一氧化氮（NO）含量；用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平并觀察其熒光圖像；用DNA損傷實(shí)驗(yàn)

6、觀察各組細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：COS能有效清除DPPH自由基和羥自由基，對H2O2直接清除能力弱；COS能減少活化的N9細(xì)胞數(shù)量，并明顯降低LPS活化的N9細(xì)胞培養(yǎng)液中NO水平、降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平，減少LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，保護(hù)N9小膠質(zhì)細(xì)胞。
　　 結(jié)論：COS對N9小膠質(zhì)細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗氧化能力，能保護(hù)N9小膠質(zhì)細(xì)胞免受LPS激活，減輕N9小膠質(zhì)細(xì)胞的氧化損傷。
　　 第二部分梔子苷通過阻斷ERK、P

7、38和NF-κB信號通路抑制LPS刺激HUVEC導(dǎo)致的ICAM-1高表達(dá)
　　 目的：研究梔子苷對脂多糖（LPS）所致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）表達(dá)的影響及其分子機(jī)制。
　　 方法：用LPS刺激HUVEC，比較有無梔子苷預(yù)處理或P38抑制劑SB203580、ERK抑制劑PD98059時ICAM-1的表達(dá)。檢測梔子苷對P38、ERK的磷酸化和NF-KB的核轉(zhuǎn)位影響。
　　 結(jié)