失血性休克復(fù)蘇大鼠模型制備的影響因素研究.pdf

1、失血性休克是戰(zhàn)創(chuàng)傷常見的休克類型,也是導(dǎo)致健康人群死亡的重要原因之一。動物模型是失血性休克治療藥物和救治策略評價的基礎(chǔ)。大鼠模型由于制備簡單、價格低廉而被廣泛應(yīng)用,但是國內(nèi)外研究結(jié)果均表明,動物的生理狀態(tài)、實驗方法及復(fù)蘇策略等影響模型的制備。在重度失血性休克模型的前期研究中發(fā)現(xiàn)麻醉與固定方式、手術(shù)方式、術(shù)野暴露時間以及紅細胞懸液輸注時間等可能影響失血性休克復(fù)蘇大鼠模型的制備。本研究從術(shù)前準備、手術(shù)和復(fù)蘇三個階段的重點環(huán)節(jié)入手,觀察休克復(fù)

2、蘇終點判斷指標(生理、生化、血液流變學(xué)與氧化應(yīng)激損傷等)的變化,探討了失血性休克復(fù)蘇大鼠模型制備的影響因素。
　　1.術(shù)前準備中影響大鼠生理、血氣分析和血液流變學(xué)指標的因素分析
　　失血性休克復(fù)蘇大鼠模型的術(shù)前準備包括麻醉和固定兩方面。重點考察了麻醉和固定的不同方式對大鼠生理、血氣分析和血液流變學(xué)指標的影響。
　　失血性休克復(fù)蘇大鼠模型制備過程中,常用的麻醉方式為戊巴比妥鈉腹腔注射,烏拉坦肌肉注射主要應(yīng)用于腸系膜微循環(huán)

3、觀察。前期研究提示,兩種麻醉方式除起效和維持時間有所不同外,對動物的生理、生化和血液流變學(xué)指標等可能亦有不同影響。在不同麻醉方式的比較中,戊巴比妥鈉腹腔注射和烏拉坦肌肉注射起效時間分別約為3.67和31min,戊巴比妥鈉腹腔注射起效顯著快于烏拉坦肌肉注射;烏拉坦肌肉注射組平均動脈壓(meanarterialpressure,MAP)、收縮壓、舒張壓和體溫低于戊巴比妥鈉腹腔注射組;術(shù)后50min烏拉坦組紅細胞、白細胞、與血小板數(shù)量有增加的

4、趨勢,紅細胞壓積(haematocrit,HCT)明顯高于戊巴比妥鈉組,而動脈血pH值和血漿粘度低于后者。另外,線繩捆綁和膠布兩種方式固定4h均使大鼠MAP、收縮壓和舒張壓下降;動脈血pH值隨時間延長而升高,總血紅蛋白(ctHb)隨著時間的延長逐漸降低,兩組間同一時間點各指標變化無顯著差別。
　　上述結(jié)果表明,烏拉坦肌肉注射麻醉影響大鼠生理、血氣分析和血液流變學(xué)指標。烏拉坦降低血壓的作用與其抑制膽堿酯酶、造成乙酰膽堿積累有關(guān)。烏拉

5、坦對血細胞計數(shù)和HCT的影響可能與其動員血細胞入血、刺激骨髓造血有關(guān)。烏拉坦可能抑制呼吸,進而降低動脈血pH值。在腸系膜微循環(huán)觀察中應(yīng)考慮烏拉坦上述影響,或選擇其他適宜的麻醉方式。線繩捆綁和膠布固定對生理、血氣分析指標的影響無顯著差別。
　　2.手術(shù)對大鼠失血耐受性與組織氧化應(yīng)激損傷的影響
　　失血性休克復(fù)蘇大鼠控制性失血模型的手術(shù)包括分離血管及插入導(dǎo)管,根據(jù)研究需要選取手術(shù)部位。同時,失血性休克復(fù)蘇模型制備耗時較長,手術(shù)對

6、氧化應(yīng)激損傷的影響可能與術(shù)野暴露時間有關(guān)。本部分著重研究了三種不同手術(shù)方式對失血耐受性的影響以及術(shù)野暴露時間對動物血氣分析、血液流變學(xué)及氧化應(yīng)激損傷的影響。
　　本部分研究比較了以下三種不同手術(shù)方式對失血耐受性的影響:①同側(cè)股動、靜脈插管(簡稱“基礎(chǔ)性手術(shù)組”)是制備模型的基礎(chǔ),經(jīng)股動脈放血,股靜脈液體復(fù)蘇;②同側(cè)股動、靜脈合并單側(cè)頸動脈插管(簡稱“頸動脈插管組”),頸動脈插管連接壓力傳感器用于實時監(jiān)測血壓;③同側(cè)股動、靜脈及單側(cè)

7、頸動脈插管,同時分離對側(cè)股動脈用于超聲多普勒方法監(jiān)測血流量(簡稱“股動脈分離組”)。三組術(shù)野依次擴大,檢測指標依次增多,針對不同的目標選用不同的手術(shù)方式。結(jié)果發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)性手術(shù)組在失血量多于頸動脈插管組和股動脈分離組的情況下(三組失血量依次約為51％,45%和45%),酸堿平衡紊亂的程度比另外兩組輕,股動脈分離組中性粒細胞和淋巴細胞高于另外兩組,而血小板數(shù)量低于后者。
　　本部分研究還比較了術(shù)野暴露時間對動物血氣分析、血液流變學(xué)及氧化

8、應(yīng)激損傷的影響,發(fā)現(xiàn)與術(shù)后即刻和1h相比,術(shù)野暴露4h動脈血pH明顯升高,而二氧化碳分壓(pCO2)和ctHb明顯降低。此外,術(shù)后即刻脾臟組織MDA含量高于術(shù)后1h和4h,腎組織MDA含量在術(shù)后1h明顯低于術(shù)后即刻和術(shù)后4h。
　　上述結(jié)果表明,術(shù)野擴大會降低動物對失血的耐受性,增加血小板的消耗,增強對骨髓造血和免疫系統(tǒng)的刺激作用,證實了手術(shù)方式對失血性休克復(fù)蘇大鼠模型制備的影響。術(shù)野暴露時間延長引起滲血增多,加重臟器氧化應(yīng)激損傷

9、。同時,長時間麻醉狀態(tài)下呼吸系統(tǒng)的變化可能影響動脈血酸堿平衡狀況。
　　3.紅細胞懸液輸注時間對大鼠生理、血氣分析和血液流變學(xué)指標的影響
　　失血性休克大鼠實驗?zāi)Ｐ偷慕?jīng)典復(fù)蘇策略包括液體復(fù)蘇和輸血兩方面,復(fù)蘇液一般采用晶體液或晶膠復(fù)合液,輸血常采用失血回輸或紅細胞懸液輸注。為使動物模型盡量模擬臨床實際情況,本課題組采用晶膠復(fù)合液與紅細胞懸液對失血性休克大鼠模型進行復(fù)蘇救治。以往的研究多關(guān)注不同復(fù)蘇液、不同血液成分及其配比對創(chuàng)

10、傷休克救治效果的影響,對輸血時機的影響研究較少,而失血性休克復(fù)蘇動物模型制備過程比較繁雜、耗時較長,不同輸血時機的選擇可能影響救治效果。因此,有必要探討紅細胞懸液不同輸注時間對大鼠生理、血氣分析和血液流變學(xué)指標的影響。同時,臨床失血性休克的救治包括緊急處理、后送、臨床檢驗、配型、備血等諸多環(huán)節(jié),即使是院內(nèi)急救,從輸血指征確認至輸血一般也耗時30min以上,不同輸血時機的比較性研究將為臨床治療提供實驗依據(jù)。
　　本研究采用重度失血性

11、休克復(fù)蘇大鼠模型,探討了紅細胞懸液延遲輸注30min對大鼠失血性休克復(fù)蘇的影響,動物隨機分為假手術(shù)組、即刻復(fù)蘇組和延遲復(fù)蘇組。發(fā)現(xiàn)紅細胞懸液延遲輸注30min使MAP和體溫恢復(fù)延遲,但延遲輸注結(jié)束后30min開始,兩組MAP無顯著差異,并且延遲輸注在體溫恢復(fù)方面表現(xiàn)出優(yōu)勢。紅細胞懸液延遲輸注在糾正酸堿平衡紊亂方面不遜于即刻復(fù)蘇。
　　上述結(jié)果表明,對失血性休克復(fù)蘇大鼠模型而言,紅細胞懸液延遲輸注30min對動物的生理、血氣分析和血

12、液流變學(xué)等指標無明顯影響。提示失血性休克復(fù)蘇大鼠模型制備過程中,紅細胞懸液延遲輸注30min不影響復(fù)蘇效果。同時,緊急救治中輸血準備工作耗時30min內(nèi)可能亦不影響臨床救治效果。
　　綜上所述,本研究從術(shù)前準備、手術(shù)和復(fù)蘇三個階段的重點環(huán)節(jié)入手,探討了麻醉和固定方式、術(shù)野范圍和暴露時間,以及紅細胞懸液輸注時間等對失血性休克復(fù)蘇大鼠模型制備的影響。發(fā)現(xiàn)了麻醉方式、術(shù)野范圍與暴露時間影響動物生理、血氣分析、血液流變學(xué)和氧化應(yīng)激損傷等指