血液灌流前后百草枯濃度的測定及影響預(yù)后的因素分析.pdf

1、百草枯(PQ)以其良好的除草效果得到人們的青睞，但隨之帶來的誤服或自殺性口服的極高死亡率給醫(yī)療工作者提出了巨大的挑戰(zhàn)。人們嘗試用各種方法搶救百草枯中毒，但至今仍不理想。臨床上常用的治療措施之一是血液灌流(HP)，HP可以清除血漿中的百草枯，防治中毒急性期的多器官功能衰竭和后期的肺纖維化及呼吸衰竭。中毒嚴(yán)重者常需多次灌流，但目前臨床缺少檢測灌流前后百草枯濃度的方法，僅憑經(jīng)驗(yàn)決定灌流次數(shù)。本課題建立了血液灌流前后血液中百草枯濃度的檢測方法，

2、同時對影響百草枯中毒預(yù)后的因素進(jìn)行了分析，為臨床監(jiān)測及救治百草枯中毒提供標(biāo)準(zhǔn)和依據(jù)。 第一部分紫外分光光度法測定血液灌流前后百草枯濃度 目的：建立紫外分光光度法測定血液灌流前后百草枯濃度的方法，為臨床有效搶救百草枯中毒提供量化指標(biāo)。 方法：(1)樣品預(yù)處理血清樣品與20％三氯乙酸按照6∶1混勻，以4000r/min離心 10min，取上清液進(jìn)行紫外測定。(2)檢測波長的選擇配制50μg/ml的百草枯溶液，以蒸餾水

3、為空白對照，進(jìn)行紫外掃描，百草枯在257nm處有最大吸收，干擾最小，選定257nm為檢測波長。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制配制500μg/ml的百草枯溶液，將其用空白血清逐級稀釋為 50、10、4、2、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05μg/ml 的百草枯溶液，按照方法(1)處理。在257nm下測定吸收度A值，以A值對濃度C進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。(4)回收率試驗(yàn)：采用加入回收法，按方法(1)處理血清，用血清上清液配制濃度為 2.00、4

4、.00、10.00、50.00μg/ml 的百草枯溶液。以同樣處理的血清上清液作參比，紫外測定，計(jì)算平均回收率。(5)精密度試驗(yàn)：配制0.4、0.8、2.0、4.0μg/ml的百草枯溶液，分別在日內(nèi)各作5次，4℃冰箱保存，并隔日對每個濃度樣品連續(xù)各做5次，分別求算日內(nèi)與目間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。(6)樣品含量測定：血清中加入20％三氯乙酸(6∶1)，渦旋混勻1min，以4000r/min離心5min，取上清液上機(jī)分析。(7)SOD測定：按照SO

5、D測試盒說明分別測定百草枯中毒患者血清中的SOD活力。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)建立的紫外分光光度法測定灌流前后百草枯血藥濃度，線性范圍寬、靈敏度高、重現(xiàn)性好；同時建立的血樣處理方法可靠，為臨床血液灌流前后百草枯濃度的測定提供了簡單快速的檢測方法。但檢測限不能滿足痕量殘留的檢測。 第二部分利用膠束毛細(xì)管電泳在線推掃富集技術(shù)檢測人體血液灌流前后百草枯殘留 目的：建立采用膠束毛細(xì)管電泳在線推掃富集技術(shù)快捷檢測血液中百草枯濃度痕

6、量殘留的方法，為臨床多次血液灌流治療百草枯中毒提供依據(jù)。 方法：(1)電泳條件與操作：未涂層熔硅毛細(xì)管，48.5cm×50μm (有效柱長40cm)；運(yùn)行緩沖液：50mmol/l磷酸鹽-80mmol/LSDS (pH=2.5)；進(jìn)樣時間 600s；進(jìn)樣壓力50nabar；運(yùn)行電壓 22kV；紫外檢測波長 260nm。實(shí)驗(yàn)前，毛細(xì)管柱分別用 1.0mol/l NaOH溶液、1.0mol/l HCl溶液、水、背景緩沖溶液(BGS)沖

7、洗 10min，用緩沖溶液平衡 10min。每次進(jìn)樣前分別用 1.0mol/l NaOH溶液、1.0mol/l HCl溶液、水和BGS各沖洗 5min。(2)樣品預(yù)處理：血消中加入10％三氯乙酸(3∶1) 靜置10min，以10000r/min離心5min，取上清液上機(jī)分析。(3)線性范圍和檢出限：準(zhǔn)確稱取百草枯標(biāo)樣適最，配成標(biāo)準(zhǔn)溶液系列(35，20，10，5，1，0.4，0.2，0.1，0.05mg/l)。在已建立電泳條件下進(jìn)行檢測，

8、以峰高對其質(zhì)量濃度(x，mg/l)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。(4)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差：取中毒病人血漿分成6份，其中3份直接按實(shí)驗(yàn)方法處理，取其分析結(jié)果平均值作為基樣濃度，另3份準(zhǔn)確加入適量百草枯標(biāo)準(zhǔn)品，按實(shí)驗(yàn)方法處理，測定結(jié)果作為加標(biāo)濃度，計(jì)算RSD和回收率。(5)樣品含量測定：對河北大學(xué)附屬醫(yī)院提供百草枯中毒患者血樣按以上方法(2)處理，進(jìn)行檢測分析。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)建立的利用膠束毛細(xì)管電泳在線富集技術(shù)檢測血液中百草枯濃度痕量殘

9、留的方法，線性范圍寬、檢測限低，靈敏度高、重現(xiàn)性好；樣品預(yù)處理方法簡單、成本低、不會造成環(huán)境污染，適合于臨床血液中百草枯濃度痕量殘留的檢測。 第三部分影響百草枯中毒預(yù)后的因素分析 百草枯中毒患者預(yù)后受多種因素影響，目前尚無特效治療方法。本實(shí)驗(yàn)對河北大學(xué)附屬醫(yī)院救治的百草枯中毒患者的預(yù)后進(jìn)行回顧性分析，為臨床治療提供依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明百草枯中毒患者的預(yù)后與諸多因素有關(guān)，現(xiàn)歸納如下： 1.服毒劑量與就診時間

10、本研究資料顯示服毒量越大，中毒癥狀越重，病死率越高。對口服中毒而言，就診越早，洗胃越早越徹底，毒物吸收越少(中毒劑量也越小)，預(yù)后就越好。 2.首次灌流時間血液灌流的早晚與患者的存活與否有很大關(guān)系。灌流越早，病死率越低。 3.并發(fā)癥百草枯可以在多種器官及組織內(nèi)蓄積，引起相應(yīng)的損傷，甚至引起多器官功能衰竭。本組病例肺、腎、肝、心及消化道的并發(fā)癥均有發(fā)生，以肺、腎為主。死亡組各種并發(fā)癥發(fā)生頻率均高于存活組，且受累器官數(shù)也較多