馬尾松銀松素合酶基因克隆及其上游調(diào)控區(qū)的研究.pdf

1、銀松素合酶(pinosylvin synthase，PS)是合成銀松素類植物抗毒素的關(guān)鍵酶，以肉桂酰輔酶A為底物催化合成銀松素。 本文以馬尾松(Pinus massoniana)為材料，通過RT-PCR，從馬尾松總RNA中，克隆PS的全長cDNA片段(PSR)。測序結(jié)果表明，開放讀碼框(ORF)編碼一個(gè)由393個(gè)氨基酸組成的PS蛋白，其cDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中PS基因核苷酸序列的同源性從98[％]到82[％]不等。

2、以CaMV35S為啟動(dòng)子，NOS為終止子，構(gòu)建了PS基因的植物表達(dá)載體。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化模式植物煙草，用于研究PS基因在植物內(nèi)的表達(dá)情況。 另外，利用PCR的方法，從馬尾松基因組DNA中，克隆PS基因的gDNA，獲得長1667 bp(PSDl)和1349 bp(PSD2)的基因全長序列。序列分析表明，二者是內(nèi)含子不同的PS基因家族成員，均含有2個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)含子，2個(gè)外顯子均分別為184 bp和998 bp，內(nèi)含子分

3、別為481 bp和163 bp。 此外，利用連接介導(dǎo)的染色體步行技術(shù)，克隆了全長1768 bp的馬尾松PS基因上游調(diào)控序列。結(jié)果表明，該序列可能存在1個(gè)TATA-box、1個(gè)CAAT-box、2個(gè)GATA-box和1個(gè)GAGA-box、1個(gè)G-box以及3個(gè)類似activator P of flavonoidbiosynthetic genes和若干個(gè)TGAC-like序列等順式作用元件。通過PCR擴(kuò)增技術(shù)，將上游調(diào)控區(qū)從5端