腦膜瘤浸潤淋巴細(xì)胞表型及特性的研究.pdf

1、目的:腦膜瘤患者的腫瘤組織中普遍存在B淋巴細(xì)胞浸潤，但是到目前為止，對于這些B細(xì)胞的表型特性及其在腦膜瘤中的可能作用機(jī)制的研究有限。我們研究了來自22個腦膜瘤標(biāo)本的腫瘤浸潤B細(xì)胞(tumor-infiltrating B cells，TIL-Bs)的表型特征和免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)重鏈可變區(qū)(variable region of heavy chain，VH)的基因多態(tài)性，并分析了這些B細(xì)胞在腦膜瘤中的可能作用

2、機(jī)制。
　　方法:1.免疫組織化學(xué)方法初步檢測腦膜瘤中是否存在B細(xì)胞浸潤、B細(xì)胞分布特征和浸潤程度。2.PCR擴(kuò)增、質(zhì)?？寺『突驕y序等分子生物學(xué)方法對294個TIL-Bs、34個正常外周血初始B細(xì)胞(naive B cells)和45個正常外周血效應(yīng)/記憶B細(xì)胞(antigen-experienced B cells)的Ig VH基因進(jìn)行測序，進(jìn)而分析這些B細(xì)胞是否經(jīng)歷過特異性抗原刺激并活化等一系列過程。3.BASELINe運(yùn)算

3、法則檢驗TIL-Bs Ig VH基因的抗原選擇強(qiáng)度。
　　結(jié)果:1.腦膜瘤中存在數(shù)量不等的CD20+B細(xì)胞和CD138+抗體分泌漿細(xì)胞的浸潤，細(xì)胞散在分布于腦膜瘤實質(zhì)中，沒有明顯的聚集趨勢，腦膜瘤微環(huán)境中未發(fā)現(xiàn)有利于B細(xì)胞生長、分化的特定區(qū)域。2.B細(xì)胞的浸潤程度與腦膜瘤WHO等級之間不存在相關(guān)性。3.與人類B細(xì)胞Ig VH等位基因(germ-line gene)相比較，每個TIL-Bs的IgVH約400個核苷酸中，平均存在19個

4、核苷酸突變(nucleotidemutation)，平均導(dǎo)致11個氨基酸替代(amino acid replacement);在陽性對照組中，外周血效應(yīng)/記憶B細(xì)胞的平均核苷酸突變數(shù)為15，平均氨基酸突變數(shù)為9;與之相反，在陰性對照組中，外周血初始B細(xì)胞幾乎沒有核苷酸突變（平均突變數(shù)目＜1）。4.我們對22個腦膜瘤標(biāo)本的294個TIL-Bs的Ig VH進(jìn)行基因測序，其中46％的TIL-Bs屬于克隆(clones)的成員，剩下的54％互不

5、關(guān)聯(lián);每個腦膜瘤平均克隆數(shù)為3，平均每個克隆內(nèi)包括6個B細(xì)胞，其中5個屬于克隆變異的B細(xì)胞(variants)。正常人外周血中的效應(yīng)/記憶B細(xì)胞和初始B細(xì)胞均未發(fā)現(xiàn)克隆現(xiàn)象。5.72％的TIL-Bs從IgM+轉(zhuǎn)換到IgG+，67％的外周血效應(yīng)/記憶B細(xì)胞從IgM+轉(zhuǎn)換到IgG+，提示TIL-Bs同外周血效應(yīng)/記憶B細(xì)胞一樣，也經(jīng)歷過抗原選擇過程。6.抗原選擇強(qiáng)度檢測提示在Ig VH框架區(qū)(framework region，F(xiàn)R)存在陰性