馬尾松苗抗松材線蟲病評價及失活線蟲分離新技術(shù)研究.pdf

1、松材線蟲病是松樹的一種毀滅性病害，培育出高抗的馬尾松苗在林業(yè)建設(shè)上具有積極的意義。廣東省馬尾松的種植，主要以信宜市的馬尾松高脂松為主，該馬尾松苗被認為是抗性松苗已被大面積種植，但在廣東本地未見對其抗性評價的報道，因此，急需建立一套馬尾松苗抗松材線蟲病的抗性評價技術(shù)。本研究選取廣東省林業(yè)科學(xué)研究院苗圃的信宜馬尾松生產(chǎn)用苗，采用“截枝套管法”對接種過和未接種過松材線蟲的三年生馬尾松苗分別進行人工接種松材線蟲，通過觀察其癥狀和檢測松木內(nèi)所含線

2、蟲數(shù)量，評價其對松材線蟲病的抗性。因抗性評價中存在大量的樣本需要分離松材線蟲，傳統(tǒng)松材線蟲的分離方法只能分離具有活性的松材線蟲，本研究針對抗性評價中大量樣本不能及時分離的問題，建立了馬尾松內(nèi)失活線蟲的分離技術(shù)，并對此技術(shù)的應(yīng)用進行了探討，取得了如下創(chuàng)新性成果：
　　1.發(fā)現(xiàn)了三年生馬尾松苗單株發(fā)病癥狀特點：
　?。?）側(cè)枝、頂部或主枝開始發(fā)病，隨即病情蔓延至全株；（2）有些癥狀只出現(xiàn)在植株的頂部、側(cè)枝或主枝上，發(fā)病部位針葉黃

3、化或變褐，病情無擴展；（3）整株針葉先褪綠，后逐漸枯死。
　　2.優(yōu)化了三年生馬尾松苗對松材線蟲病的抗性評價技術(shù)。接種122 d后，將三年生馬尾松苗的抗性分為5個等級，每個等級間癥狀差異顯著。0級，高抗，馬尾松苗無發(fā)病癥狀；1級，中抗，馬尾松苗1/4以下針葉變黃，接種后期（118 d左右）開始發(fā)病，再過2-4d可達到1級癥狀；2級，低抗，馬尾松苗2/4-3/4針葉變黃、1/4以下針葉變紅，中后期（100 d左右）開始發(fā)病，再過6-

4、8 d可達到2級癥狀；3級，感病，馬尾松苗3/4左右針葉變紅，接種20 d即可發(fā)病，再過14 d可達到3級癥狀；4級，高感，馬尾松苗全株枯死，接種前期（8-20 d）開始發(fā)病，再過5-30 d即死亡。在此基礎(chǔ)上同時對不同抗性等級松苗內(nèi)線蟲的平均含量進行測定，研究結(jié)果表明，隨著三年生馬尾松苗發(fā)病癥狀的不斷擴展，線蟲含量逐漸增多；植株完全枯死后，枯死馬尾松內(nèi)松材線蟲因缺少水分而部分死去，線蟲含量隨之降低。
　　3.三年生馬尾松苗抗性存

5、在明顯分化。統(tǒng)計接種122 d時馬尾松苗等級數(shù)的研究結(jié)果表明，初次接種的13棵三年生馬尾松苗的0級、1級、2級、3級和4級發(fā)病等級的松苗數(shù)分別為5、1、2、2和3棵，其發(fā)病率和死亡率分別為61.54％和30.77％；第二次接種的6棵三年生馬尾松苗的0級、1級、2級、3級和4級發(fā)病等級的松苗數(shù)分別為4、1、0、0和1棵，其發(fā)病率和死亡率分別為33.33％和16.67％。二次接種較初次接種的馬尾松苗對松材線蟲的抗性強，表明馬尾松苗期種植前的

6、抗性篩選很有必要。
　　4.建立了馬尾松病木內(nèi)失活線蟲的分離技術(shù)，成功將失活松材線蟲分離出來，并且酶解出來的松材線蟲形態(tài)完整，可用于松材線蟲計數(shù)和PCR鑒定。
　　5.優(yōu)化了馬尾松病木內(nèi)失活線蟲的分離參數(shù)。確定了冰凍、常溫和低溫材料的最適酶解濃度分別為0.005/0.001 mg/μL、0.01/0.002 mg/μL和0.005/0.001 mg/μL，同時冰凍、常溫和低溫材料的最適酶解時間同為6h。
　　6.確定了