線粒體腦肌病和肌病患者病理及基因突變研究.pdf

1、目的：①了解線粒體腦肌病的臨床表現(xiàn)及輔助檢查手段，加深對線粒體腦肌病各個亞型的認識；②探討線粒體腦肌病及肌病患者骨骼肌的組織病理特點及mtDNA基因突變情況，為疾病的診斷提供依據(jù)；③了解基因型與表型的關(guān)系，從而預(yù)測擁有某種突變基因的患者的預(yù)后及可能發(fā)展為某種綜合癥的風(fēng)險；④探討線粒體腦肌病的遺傳特點，為患者的家系進行基因的篩查，以便于發(fā)現(xiàn)無癥狀的突變攜帶者。
　　 方法：通過臨床表現(xiàn)及輔助檢查資料，總結(jié)8例線粒體肌病及腦肌病患者

2、的臨床表現(xiàn)。⑴取其肌肉活檢標本用異戊烷和液氮速凍后切片，常規(guī)和酶組化染色，光鏡下觀察染色后骨骼肌組織的病理特點。⑵利用堿變性法提取肌肉組織和（或）血液的mtDNA。⑶選取四個較常見的突變位點（A3243G、A8344G、T8993G和T8993C）進行突變的檢測。針對A3243G、A8344G、T8993G和T8993C突變分別選取特定的引物和限制性內(nèi)切酶，應(yīng)用聚合酶鏈式反應(yīng)-限制片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）進行特異性擴增，然后用

3、特定的限制性內(nèi)切酶對擴增產(chǎn)物進行酶切，用瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA片段長度的方法，檢測8例線粒體腦肌病和肌病患者（2例MELAS和6例線粒體肌?。┘?0例非線粒體疾病患者（對照）骨骼肌細胞中mtDNA是否發(fā)生A3243G、A8344G、T8993G和T8993C突變。⑷對其中一例線粒體腦肌病伴高乳酸血癥和卒中樣發(fā)作（MELAS）患者及其部分母系家屬的血液標本進行A3243G突變檢測，同時計算突變比例。
　　 結(jié)果：①8例線粒體腦肌

4、病和肌病患者的肌肉病理均發(fā)現(xiàn)破碎紅纖維（RRF），且RRF的出現(xiàn)頻率均大于4％。②1例MELAS（例1）和1例線粒體肌病患者肌肉存在A3243G點突變；1例線粒體肌病患者存在A8344G點突變；患者均未發(fā)現(xiàn)T8993G和T8993C突變。對照組未發(fā)現(xiàn)以上4個位點的突變。③例1及其一兄一弟的血液中均檢測出A3243G突變，而其母血中未發(fā)現(xiàn)此突變。例1肌肉中及血液中的A3243G的突變比例分別為：64.35％和38.09％；例1、其兄及其弟