毒熱平注射液對(duì)FM-,1-感染小鼠治療作用的研究.pdf

1、目的：毒熱平注射液是由黃芩、梔子、豬膽粉、燈盞花等四味藥組成的中藥復(fù)方制劑，四藥共奏清熱燥濕、涼血解毒、活血通絡(luò)之功。本實(shí)驗(yàn)采用流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株(FM<,1>)感染小鼠作為模型，研究毒熱平注射液對(duì)其肺損傷及免疫功能的影響并闡明其作用機(jī)制，為毒熱平注射液的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法 本實(shí)驗(yàn)共分為三個(gè)部分： 第一部分為毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠死亡保護(hù)率的影響：實(shí)驗(yàn)選用ICR小鼠，隨即分為七組，即正

2、常組、FM<,1>感染模型組、利巴韋林組、雙黃連組、毒熱平注射液大、中、小劑量組，腹腔注射給藥，每天一次，連續(xù)10天；正常組和模型組小鼠注射生理鹽水對(duì)照，上述小鼠連續(xù)觀察至感染后14天，計(jì)算各組死亡率及死亡保護(hù)百分率。 第二部分為毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠肺損傷及其治療機(jī)制的研究：(1)毒熱平注射液對(duì)FMl感染小鼠肺指數(shù)及肺臟病理變化的影響：FM<,1>造模當(dāng)天給予毒熱平注射液治療，一次/天，第7天將小鼠摘眼球放血處死，

3、摘取肺臟，計(jì)算肺指數(shù)。同時(shí)各組取肺組織作病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)；(2)采用Griess法測(cè)定血清及肺勻漿中NO含量、采用ELISA試劑盒檢測(cè)肺勻漿中細(xì)胞因子IL-1、TNF-α含量。 第三部分為毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠免疫功能的影響：實(shí)驗(yàn)采用MTT法測(cè)定小鼠脾臟T細(xì)胞增殖能力、用ELISA試劑盒檢測(cè)ConA誘生INF-γ含量、采用中性紅比色法測(cè)定腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力、采用EIASA試劑盒檢測(cè)肺勻漿中細(xì)胞因子IL-4及IL-10

4、含量。 結(jié)果 1 毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠死亡保護(hù)作用：毒熱平注射液大、中劑量治療組對(duì)FM<,1>感染小鼠的死亡保護(hù)率為29.1％，與模型對(duì)照組比較，經(jīng)x<'2>檢驗(yàn)，差異顯著，P<0.05。 2 毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠肺損傷及其治療機(jī)制的研究 (1)毒熱平注射液FM<,1>感染小鼠肺指數(shù)及其肺臟病理變化的影響：毒熱平注射液大、中、小劑量組小鼠的肺指數(shù)低于模型對(duì)照組，差異顯著，P<0

5、.01；肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠肺臟呈現(xiàn)重度間質(zhì)性肺炎病變，肺臟正常組織結(jié)構(gòu)消失，結(jié)締組織增生，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，形成實(shí)變區(qū)，組織間見(jiàn)大量紅細(xì)胞，血管內(nèi)充血；各藥物治療組病變明顯減輕，其組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化相差不大。 (2)毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠肺勻漿及血清中NO含量的影響：小鼠感染FM<,1>后，肺勻漿及血清中NO含量顯著上升，肺勻漿中與正常組比較，差異極顯著，P<0.001，血清NO含量差異顯著，P<0.

6、05；毒熱平大、中、小劑量組均可降低肺勻漿及血清中的NO含量，肺勻漿NO含量差異均極顯著，P<0.001；血清中毒熱平大、中劑量組差異較顯著，P<0.01，毒熱平小劑量組差異顯著，P<0.05。 (3)毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠肺勻漿中致炎因子的影響：模型組肺勻漿中細(xì)胞因子IL-1及TNF-α含量顯著升高，與正常組比較，差異極顯著，P<0.001；各用藥組含量均明顯下降，與模型組比較，差異極顯著，P<0.001；

7、 3 毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠免疫功能的影響 (1)小鼠感染FM<,1>后對(duì)免疫系統(tǒng)功能有明顯抑制作用，感染后T細(xì)胞的增殖能力及誘生INF-γ的能力顯著降低，與正常對(duì)照組小鼠比較，差異顯著(P值均<0.001)；毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠T細(xì)胞的增殖能力及誘生INF-7能力有顯著上調(diào)作用，與模型組比較，差異顯著(P值均<0.01)； (2)FM<,1>感染小鼠模型組腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能明顯降低，與正

8、常組比較差異極顯著，P<0.001；毒熱平大、中、小劑量組對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬功能均有上調(diào)作用，與模型組比較，P<0.001； (3)FM<,1>感染小鼠后，小鼠肺勻漿中IL-4、IL-10含量顯著升高，與正常組比較差異極顯著，P<0.001；各用藥組含量均下降，與模型組比較，毒熱平大、中劑量組差異極顯著，P<0.001，毒熱平小劑量組IL-4含量差異極顯著，P<0.001，IL-10含量差異顯著，P<0.05。 結(jié)論

9、 1．毒熱平注射液具有抗病毒作用通過(guò)死亡保護(hù)率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：毒熱平注射液大、中、小劑量組與FM<,1>感染小鼠模型組相比較，死亡率顯著下降，死亡保護(hù)率顯著升高，癥狀明顯改善，顯示毒熱平注射液具有抗流感病毒作用，對(duì)FM<,1>感染小鼠具有一定的保護(hù)作用。 2．毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠的肺組織損傷具有保護(hù)和改善作用： 流感病毒FM<,1>感染小鼠后導(dǎo)致肺組織出現(xiàn)明顯的病理?yè)p傷，表現(xiàn)為肺指數(shù)明顯升高，肺臟正常組織結(jié)構(gòu)消

10、失，結(jié)締組織增生，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，間見(jiàn)大量紅細(xì)胞，血管內(nèi)充血；毒熱平注射液可以通過(guò)減少促炎因子IL-1及TNF-α和炎癥介質(zhì)NO含量等途徑，從而減輕肺組織炎性損傷，降低肺指數(shù)，改善肺臟病理變化，對(duì)FM<,1>感染小鼠肺臟具有保護(hù)作用。 3．毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠免疫功能具有調(diào)節(jié)作用： 1)毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠的免疫功能具有明顯的上調(diào)作用：流感病毒FM<,1>感染小鼠后對(duì)其具有明顯的抑制作用，毒

11、熱平注射液能顯著提高FM<,1>感染小鼠T細(xì)胞增值能力、T細(xì)胞誘生INF-γ的能力及其活性、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，提示毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠的免疫功能具有明顯的上調(diào)作用。 2)毒熱平注射液對(duì)FM<,1>感染小鼠肺組織勻漿中細(xì)胞因子具有調(diào)節(jié)作用：流感病毒FM<,1>感染小鼠后能導(dǎo)致流感病毒感染后造成的Th<,1>/Th<,2>比例失衡，毒熱平注射液能促進(jìn)FM<,1>感染小鼠Th<,1>及其分泌的細(xì)胞因子INF-γ，下調(diào)