金柑屬（Fortunella Swingle）及其近緣屬植物的ISSR及SSR分析.pdf

1、金柑屬(Fortunella)植物為蕓香科(Rutacease)柑橘亞科(Aurantioideae)柑橘族(Citreae)柑橘亞族(Citrinae)真正柑橘類植物，是我國(guó)著名的特產(chǎn)果樹(shù)之一。同時(shí)，金柑果實(shí)亦廣泛的用來(lái)做蜜餞，飲料，罐頭，果汁，果酒等休閑食品，或提取香精油這種重要的工業(yè)原料。《本草綱目》中稱該果味酸、甘、溫、無(wú)毒，能下氣、止渴、解酒、除臭?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，它具有軟化血管、治療高血壓、調(diào)節(jié)生理功能紊亂之功效。金柑果皮

2、富含類檸檬苦素(Limonoids)，具有抗腫瘤作用，能誘發(fā)和激活解毒酶谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(Glatathione-s-transferasc)的活性，能抑制化學(xué)致癌物質(zhì)的致癌，是典型的第三代水果。 針對(duì)目前金柑屬植物研究上所存在的親緣關(guān)系不明了的問(wèn)題，本研究首次利用ISSR和SSR分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)金柑屬內(nèi)各分類群之間的親緣關(guān)系以及金柑屬與近緣屬植物之間的親緣關(guān)系進(jìn)行了探討，為我國(guó)金柑屬植物種質(zhì)資源的鑒定、保存與利用提供理論基礎(chǔ)。其

3、主要結(jié)論如下： 1、以金柑屬材料融安金彈(F.crassifoliaSwingle)為試材，利用L16(45)正交設(shè)計(jì)表對(duì)ISSR-PCR和SSR-PCR反應(yīng)體系中幾個(gè)主要影響因子進(jìn)行了優(yōu)化篩選。結(jié)果表明在ISSR-PCR反應(yīng)體系中，各組分最適濃度為：模板1.2ng.μL-1，引物0.16μmol.L-1，dNTPs0.15μmol.L-1，Taq酶0.05U.μL-1，Mg2+1.50μmol.L-1，1×PCRbuffer，

4、補(bǔ)充ddH20至20μL。ISSR-PCR反應(yīng)擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃，4min；94℃，45s；52±3℃，1min：72℃，2min；40個(gè)循環(huán)；72℃，10min；4℃保存。在SSR-PCR反應(yīng)體系中，各組分終濃度分別為：1×buffer，2.5mmol.L-1MgCl2，0.15μmol.L-1dNTPs，上游引物和下游引物各0.2μmol.L-1，TaqDNA聚合酶0.075U.L-1，模板1ng.μL-1，補(bǔ)充ddH2O至20μl

5、。SSR-PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃，3min；94℃，1min；53℃，1min；72℃1min，35個(gè)循環(huán)：72℃，10min；4℃保存。 2、利用優(yōu)化的PCR反應(yīng)體系，對(duì)所選取的材料進(jìn)行了親緣關(guān)系分析。從100條ISSR引物中篩選出16條引物，共擴(kuò)增出157條帶紋，其中多態(tài)性帶紋有152條，NTSYS-PC2.02a軟件聚類結(jié)論顯示：在柑橘類植物中，金柑屬(Fortunella)植物和柑橘屬(Citrus)植物親緣關(guān)系較近，

6、和枳屬(Poncirus)次之，這支持前人對(duì)柑橘類植物的劃分。金柑屬10個(gè)分類群可劃分為五類：Ⅰ：金豆(F.hindsiivar.Chinton)；Ⅱ：寧波羅浮(F.margaritaSwingle)和溫州羅浮(F.margaritaSwingle)；Ⅲ：寧波羅紋(F.japonicaSwingle)；Ⅳ：藍(lán)山金柑(F.crasifoliaSwingle)，瀏陽(yáng)金柑(F.crassifoliaSwingle)，寧波金彈(F.crasif

7、oliaSwingle)，融安金彈(F.crassifoliaSwingle)，溫州金彈(F.crassifoliaSwingle)；Ⅴ：長(zhǎng)壽金柑(F.obovataTanaka)。前人研究表明，四季橘(C.madurensis)為金柑屬(Fortunella)與柑橘屬(Citrus)的雜交種，本實(shí)驗(yàn)也表明，四季橘(C.madurensis)和金柑屬(Fortunella)物種聚在一起，但與其它金柑屬材料的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，表明其起源和金柑

8、屬(Fortunella)及柑橘屬(Citrus)植物有關(guān)。柑橘屬(Citrus)內(nèi)，枸櫞(C.medica)、柚(C.grandis)和寬皮柑橘(C.reticulata)都能很好的區(qū)分，支持其為現(xiàn)代栽培柑橘的三個(gè)基本種的劃分。枸櫞類的的佛手和其它材料的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)：紅河大翼橙首先和柚類聚在一起，表明紅河大翼橙與現(xiàn)代柚類的起源有一定的關(guān)系。枳屬中的三份材料親緣關(guān)系均較近，這也顯示出枳屬的遺傳背景比較簡(jiǎn)單。 3、對(duì)金柑屬(For

9、tunella)植物的SSR分析結(jié)果顯示：金柑屬10個(gè)分類群在相似性系數(shù)為0.69處聚在一起，與柑橘屬(Citrus)區(qū)分開(kāi)來(lái)。金柑屬(Fortunella)內(nèi)，在相似性系數(shù)為0.82處又可以劃分為六類。Ⅰ：長(zhǎng)壽金柑(F.obovataTanaka)；Ⅱ：金豆(F.hindsiiwar.Chinton)；Ⅲ：溫州羅浮(F.margaritaSwingle)；Ⅳ：寧波羅浮(F.margaritaSwingle)；Ⅴ：寧波羅紋(F.japo

10、nicaSwingle)；Ⅵ：藍(lán)山金柑(F.crassifoliaSwingle)，寧波金彈(F.crasifoliaSwingle)，融安金彈(F.crasifoliaSwingle)，溫州金彈(F.crasifoliaSwingle)，瀏陽(yáng)金柑(F.crasifoliaSwingle)。在柑橘屬中，聚類情況較為復(fù)雜，各材料間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，充分反映了柑橘屬植物遺傳背景復(fù)雜的特點(diǎn)。但也可以大致分為三大類，即Ⅰ：合江佛手(C.medica

11、.var.sarcodactylis)，南川佛手(C.medica.var.sarcodactylis)(枸櫞類)；Ⅱ：嶺南沙田柚(C.grandisOsbeck)(柚類)；Ⅲ：馬蜂柑(C.hystrixDC)，莽山野桔(C.reticulataBlanco)，道縣野桔(C.reticulataBlanco)，印度酸桔(C.indicaTanaka)，立花桔(C.tachibana(Mak.)Tanaka)(寬皮柑橘類)。這與Scora