愛普列特治療老齡大鼠前列腺增生癥作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的： 研究愛普列特作用后，老年大鼠5α-還原酶mRNA表達(dá)的變化及其對(duì)微血管，細(xì)胞凋亡等方面的作用，評(píng)價(jià)新型5α-還原酶抑制劑愛普列特對(duì)老齡大鼠前列腺組織的影響，重點(diǎn)探討5α-還原酶抑制劑對(duì)治療良性前列腺增生癥的作用機(jī)制，為治療前列腺增生癥的藥物選擇提供理論基礎(chǔ)。 方法： 1.選取清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物70只雄性15月齡老年SD大鼠，體重540±20g，均由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，所有動(dòng)物為SPF級(jí)動(dòng)物。將老齡SD大鼠

2、分為四組：大劑量組(A組)：SD大鼠20只，灌胃口服愛普列特片(3mg.kg-1.d-1)4周；小劑量組(B組)：SD大鼠20只，灌胃口服愛普列特片(Img.kg-1.d-1)4周；藥物對(duì)照組(C組)：SD大鼠20只，灌胃口服保列治片(1mg.kg-1.d-1)4周；空白對(duì)照組(D組)：SD大鼠10只，灌胃口服生理鹽水4周。 2.5α-還原酶mRNA檢測(cè)：通過(guò)熒光定量PCR法檢測(cè)前列腺組織中5α-還原酶mRNA相對(duì)表達(dá)量，觀察不

3、同類型的5α-還原酶抑制劑對(duì)5α-還原酶mRNA表達(dá)的作用。 3.細(xì)胞凋亡蛋白檢測(cè)：免疫組化法檢測(cè)前列腺組織中Bax，Bcl-2蛋白表達(dá)，觀察5α-還原酶抑制劑作用前后細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)量的改變。 4.微血管相關(guān)蛋白測(cè)定：免疫組化法檢測(cè)前列腺組織中eNOS蛋白表達(dá)，觀察用前列腺組織在用藥前后微血管生長(zhǎng)相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。 5.前列腺組織微血管密度測(cè)定：CD34蛋白表達(dá)于前列腺組織中微血管內(nèi)皮，經(jīng)免疫組化染色后，鏡下

4、計(jì)算每視野下微血管數(shù)目，觀察前列腺組織在藥物作用前后微血管密度的變化。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，將所得計(jì)量數(shù)據(jù)采用one-way ANOVA，顯著性水平P<0.05。 結(jié)果： 1.各實(shí)驗(yàn)組5α-還原酶mRNA表達(dá)變化： 用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)前列腺組織中1型5α-還原酶mRNA與2型5α-還原酶mRNA表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：藥物治療組中1型5α-還原酶mRNA(A組，B組與C組)與

5、正常組(D組)之間的表達(dá)量無(wú)明顯差異(11.49±1.487，45±2.31，vs11.21±1.75，P>0.05)，同樣，2型5α-還原酶mRNA(A組，B組與C組)與正常組(D組)之間的表達(dá)量也無(wú)明顯差異(6.32±0.84，7.03±0.67vs6.82±0.45，P0.05)，表明老齡大鼠經(jīng)短期小劑量的5α還原酶抑制劑(愛普列特)治療后，其前列腺組織中5α還原酶mRNA的表達(dá)量并未發(fā)生明顯變化，可推測(cè)短期小劑量的5α還原酶抑制

6、劑(愛普列特)只能通過(guò)抑制5α還原酶的活性以減少睪酮向雙氫睪酮的轉(zhuǎn)化來(lái)減小前列腺的體積，而不是抑制5α還原酶mRNA表達(dá)量減少。 2.細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)變化： 利用免疫組化法檢測(cè)前列腺組織中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示：與正常組(D組)相比，各用藥組(A組、B組和C組)Bcl-2蛋白表達(dá)量明下降(P<0.05)，而Bax蛋白表達(dá)升高(P<0.05)。因此，Bax/Bcl-2比值升高(P<0.0

7、5).以上結(jié)果表明，5α還原酶抑制劑(愛普列特)對(duì)老齡大鼠前列腺增生組織中凋亡蛋白的表達(dá)有明顯的作用，可能呈劑量依賴性，但由于實(shí)驗(yàn)組間愛普列特灌服劑量差異較小，凋亡蛋白表達(dá)在大小劑量組之間雖然有部分差異，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.各實(shí)驗(yàn)組微血管密度和eNOS蛋白變化的比較結(jié)果：免疫組化法檢測(cè)前列腺組織中CD34的表達(dá)，同時(shí)計(jì)算前列腺組織中微血管密度(MVD)，發(fā)現(xiàn)用藥組(A組、B組和C組)的MVD值明顯低于正常組(D組)(4.3

8、5±2.20，6.25±1.29，4.90±1.29vs8.00±2.98，P<0.05)，而且愛普列特大劑量組(A組)的MVD值明顯低于愛普列特小劑量組(B組)(4.35±2.20vs6.25±1.29，P<0.05)；在對(duì)微血管生長(zhǎng)相關(guān)蛋白eNOS檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)A、B、C組eNOS蛋白表達(dá)量明顯低于D組(72.27±48.50，163.89±91.40，144.82±80.78vs293.58±116.0，P<0.05)，A組明顯低于B

9、組(72.27±48.50vs163.89±91.40，P<0.05)。表明愛普列特對(duì)微血管生長(zhǎng)有明顯抑制作用，并呈現(xiàn)劑量依賴性。 結(jié)論： 1.愛普列特可能對(duì)前列腺增生組織中5α還原酶mRNA的表達(dá)無(wú)明顯影響。 2.愛普列特可以顯著上調(diào)大鼠前列腺組織中凋亡促進(jìn)蛋白Bax的表達(dá)，下調(diào)凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)前列腺增生組織細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 3.愛普列特對(duì)前列腺增生組織eNOS蛋白表達(dá)也有顯著抑制性作