抑癌基因RASSF1A聯(lián)合突變型K-Ras在鼻咽癌發(fā)病機(jī)制中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究抑癌基因RASSF1A在鼻咽癌中的表達(dá)及作用機(jī)制，并探討其與突變型K-Ras基因的關(guān)系。
　　 方法:采用RT-PCR半定量檢測(cè)在鼻咽癌細(xì)胞系、原發(fā)鼻咽癌組織及慢性鼻咽炎組織中RASSF1A基因的表達(dá)水平；通過構(gòu)建人RASSF1A基因的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)/RASSF1A，利用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將構(gòu)建好的人RASSF1A基因的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)/RASSF1A和pcD

2、NA3.1(+)轉(zhuǎn)染入人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2中，采用RT-PCR，Western-blot檢測(cè)RASSF1A的瞬時(shí)表達(dá)，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染該基因?qū)?xì)胞周期的影響以及是否誘發(fā)細(xì)胞凋亡；將突變型K-Ras的表達(dá)載體pCGN-HA-RasG12V與RASSF1A共轉(zhuǎn)染入人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2中，流式細(xì)胞儀檢測(cè)外源性K-Ras的導(dǎo)入對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，以及臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)RASSF1A單轉(zhuǎn)染和RASSF1A與K-Ras共轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞增殖能

3、力的影響。
　　 結(jié)果: RASSF1A在鼻咽癌細(xì)胞系中存在低表達(dá)，其在原發(fā)鼻咽癌組織中的表達(dá)水平明顯低于慢性鼻咽炎組織(P＜0.01)； RT-PCR及Western-blot結(jié)果證實(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的RASSF1A表達(dá)水平明顯上調(diào)；瞬時(shí)轉(zhuǎn)染RASSF1A后可使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期(P＜0.01)，同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和增殖抑制；共轉(zhuǎn)染結(jié)果證實(shí)突變型K-Ras能夠顯著增強(qiáng)RASSF1A誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和增殖抑制效應(yīng)。
　　 結(jié)