雞傳染性支氣管炎H120株活疫苗耐熱保護(hù)劑的工藝研究.pdf

1、傳染性支氣管炎(Infectious Bronchitis，IB)是由傳染性支氣管炎病毒引起的一種常見(jiàn)的傳染病。該病毒具有囊膜結(jié)構(gòu)，且對(duì)溫度敏感，該特性為研制傳染性支氣管活炎疫苗耐熱保護(hù)劑研究增加了難度。由于溫度容易影響該病毒的活性，導(dǎo)致凍干后疫苗產(chǎn)品的病毒效價(jià)損失較高，使得傳染性支氣管炎凍干苗的貯存面臨挑戰(zhàn)，這也是目前國(guó)內(nèi)生物制品行業(yè)的一個(gè)普遍性難題。國(guó)內(nèi)常規(guī)的凍干苗必須保存在-15℃以下，且保存期偏短，而國(guó)外的凍干苗產(chǎn)品在2～8℃可

2、保存兩年以上。為降低疫苗效價(jià)的損失、提高疫苗質(zhì)量、延長(zhǎng)保存期、解決冷鏈運(yùn)輸?shù)葐?wèn)題，本文旨在研制雞傳染性支氣管炎病毒H120株耐熱保護(hù)劑。
　　本文的研究?jī)?nèi)容分為三部分，即耐熱保護(hù)劑成分的篩選以及凍干曲線(xiàn)參數(shù)的調(diào)試、耐熱保護(hù)劑的耐老化實(shí)驗(yàn)、耐熱保護(hù)劑凍干疫苗的實(shí)驗(yàn)。
　　在耐熱保護(hù)劑成分篩選的實(shí)驗(yàn)中，共嘗試了8組不同的配方，編號(hào)從A到H，其中C組又分為C1～C6，D組分為D1、D2。分組凍干后，通過(guò)比較產(chǎn)品凍型、溶解度、殘留水

3、分含量、效價(jià)損失，最終篩選出效果最好的E組作為耐熱保護(hù)劑，其主要成分為多聚蛋白胨和海藻糖。凍干曲線(xiàn)的調(diào)試對(duì)凍干疫苗的質(zhì)量也是至關(guān)重要的，必須確保每組耐熱保護(hù)劑都對(duì)應(yīng)一條合適的凍干曲線(xiàn)。首先對(duì)不同的耐熱保護(hù)劑配制的疫苗進(jìn)行少量?jī)龈?，依?jù)凍干后產(chǎn)品的形態(tài)，改變凍干曲線(xiàn)的參數(shù)，如預(yù)凍的最低溫度、升華干燥的溫度及真空度等。最終確保當(dāng)批量疫苗凍干時(shí)，產(chǎn)品的形態(tài)一致且美觀，方可將此次調(diào)試的凍干曲線(xiàn)作為標(biāo)準(zhǔn)。調(diào)試的凍干曲線(xiàn)（E組）參數(shù)如下:預(yù)凍的最低

4、溫度為-45℃，升華干燥的真空度為0.08mbar，升華溫度為-15℃，解析干燥溫度為26℃，總凍程約43 h。
　　將E組制成的疫苗分別在37℃、室溫(20℃)、2～8℃環(huán)境條件下放置10天、2個(gè)月、1年，間隔一段時(shí)間測(cè)定一次EID50，同時(shí)設(shè)置常規(guī)疫苗作為對(duì)照組。數(shù)據(jù)顯示，隨著時(shí)間的推移，疫苗病毒的效價(jià)會(huì)持續(xù)不斷降低。耐熱保護(hù)劑凍干疫苗在37℃條件下放置10d，其效價(jià)由10-4.32下降到10-3.38;在室溫中放置2個(gè)月，效

5、價(jià)由10-4.625降到10-3.620，常規(guī)疫苗則在1周后就從10-4.75降到10-3.52;耐熱保護(hù)劑凍干疫苗在2～8℃條件下放置12個(gè)月時(shí)，效價(jià)由10-4.36降到10-3.37，第6個(gè)月時(shí)檢測(cè)效價(jià)達(dá)到10-3.82，而常規(guī)疫苗在半年之后效價(jià)已經(jīng)從10-4.45降到10-3.44。
　　將耐熱保護(hù)劑凍干疫苗用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，包括安全性檢驗(yàn)、免疫效力檢驗(yàn)及抗體水平監(jiān)測(cè)。將易感雞分為A（耐老化前的疫苗）、B（耐老化后的疫苗）、C（

6、PBS對(duì)照）三組，每組10只。安全性檢驗(yàn)的免疫劑量為10羽份，三組的存活率均達(dá)到80％以上。免疫效力檢驗(yàn)使用的攻毒株為M41株，攻毒劑量為1羽份，A、B兩組的保護(hù)率均達(dá)到80％以上，對(duì)照組只有1只雞存活。對(duì)發(fā)病雞與外表健康雞進(jìn)行解剖，作氣管的病理切片，電鏡下可見(jiàn)發(fā)病雞的氣管纖毛脫落，細(xì)胞壞死，而外表健康雞則纖毛完整?？贵w水平測(cè)試數(shù)據(jù)表明，A、B兩組抗體消長(zhǎng)趨勢(shì)一致，且A組效果較好。兩組在21～28 d均達(dá)到抗體的最高水平。
　　綜