北細(xì)辛種質(zhì)資源顯微和分子鑒別方法.pdf

1、細(xì)辛為常用中藥，北細(xì)辛（Asarum heterotropoidesFr．Schmidtvar．mandshuricum）、漢城細(xì)辛（A.sieboldii Miq.f.seoulense）和華細(xì)辛（A.sieboldii Miq）為2015版《中國(guó)藥典》收錄，以北細(xì)辛質(zhì)量最優(yōu)，目前已成為市場(chǎng)的主流品種。為提高中藥細(xì)辛臨床用藥的安全性和可控性，加強(qiáng)中藥生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，實(shí)現(xiàn)中藥用藥“一藥一物”的質(zhì)量控制目標(biāo)，本文以北細(xì)辛及其近緣植物為研

2、究對(duì)象，采用顯微結(jié)構(gòu)比較、生物化學(xué)鑒別和DNA條形碼鑒別等方法，開展了北細(xì)辛種質(zhì)資源顯微和分子鑒別研究，取得了如下研究結(jié)果：
　　1.采用常規(guī)石蠟切片法和無色指甲油印痕法對(duì)北細(xì)辛及其近緣植物葉片解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較研究。研究結(jié)果顯示：北細(xì)辛及其近緣植物在葉片表皮細(xì)胞大小及排列方式、柵欄組織、葉肉細(xì)胞形態(tài)及排列方式和葉片表皮氣孔密度等方面存在差異。北細(xì)辛葉片柵欄組織由一層柱狀細(xì)胞組成，漢城細(xì)辛和華細(xì)辛葉片柵欄組織均由兩層柱狀細(xì)胞組成，尾

3、花細(xì)辛和花葉尾花細(xì)辛葉片柵欄組織由一層柱狀細(xì)胞組成，但其細(xì)胞較小且排列疏松，青城細(xì)辛、川滇細(xì)辛和長(zhǎng)毛細(xì)辛則無明顯分化的柵欄組織，葉片柵欄組織的差異，可作為北細(xì)辛的鑒別特征。北細(xì)辛、漢城細(xì)辛和華細(xì)辛葉片葉肉細(xì)胞葉綠體小而密，青城細(xì)辛和長(zhǎng)毛細(xì)辛葉片葉肉細(xì)胞葉綠體較大，花葉尾花細(xì)辛葉片葉肉細(xì)胞葉綠體主要分布在葉肉組織上層細(xì)胞，葉肉細(xì)胞中葉綠體間的差異性也可為細(xì)辛屬植物分類鑒別提供參考。
　　2.種子蛋白電泳圖譜顯示，北細(xì)辛和漢城細(xì)辛共有

4、特征譜帶5條（A5、A6、B1、B2、B3），北細(xì)辛種內(nèi)共有特征譜帶5條（A5、A6、B1、B2、B3），特異性譜帶5條（A2、A3、A4、C1、C2）；漢城細(xì)辛種內(nèi)共有特征譜帶6條（A4、A5、A6、B1、B2、B3），特異性譜帶4條（A1、A3、C1、C2），但未發(fā)現(xiàn)種子蛋白種間特異性譜帶。因此，利用種子蛋白電泳圖譜不能實(shí)現(xiàn)北細(xì)辛和漢城細(xì)辛種子的鑒別。
　　3.本實(shí)驗(yàn)選取核基因（ITS、ITS1、ITS2）及葉綠體基因（mat

5、K、rbcL、rpoC1、trnL-F、psbA-trnH）作為候選DNA條形碼，并探討不同候選DNA條形碼在細(xì)辛屬植物鑒別中的有效性。研究結(jié)果顯示：在8個(gè)候選DNA條形碼中，核基因組ITS1序列具有最高的種間遺傳變異和相對(duì)較低的種內(nèi)遺傳變異，且其鑒定率較高（88.75％），因此，推薦其作為細(xì)辛屬植物鑒別DNA條形碼。而核基因組ITS、ITS2序列和葉綠體基因組trnL-F序列種內(nèi)遺傳變異較大，葉綠體基因組matK、rbcL、rpoC1