伏毛鐵棒錘有效部位對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎治療作用的初步研究.pdf

1、目的：探討伏毛鐵棒錘有效部位對(duì)實(shí)驗(yàn)性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的治療作用及作用機(jī)制。
　　方法：1.采用溶劑法對(duì)伏毛鐵棒錘進(jìn)行提取，利用大孔吸附樹(shù)脂、陽(yáng)離子交換樹(shù)脂技術(shù)對(duì)伏毛鐵棒錘有效部位進(jìn)行富集；采用紫外分光光度法對(duì)伏毛鐵棒錘非生物堿有效部位總黃酮類成分進(jìn)行含量測(cè)定。
　　2.通過(guò)MTT比色法觀測(cè)伏毛鐵棒錘有效部位、有效成分對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。
　　3.雄性SD大鼠72只，體重180±20 g，隨機(jī)分為9組。

2、除空白組外，其余各組大鼠右后足墊皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(Freund’s Complete Adjuvant，CFA)制備大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis, AA)模型。造模后第8天開(kāi)始灌胃給藥，每日一次。30％醇部位高、中、低劑量組以30%醇洗脫部位的溶液(60，30，15 mg/kg)灌服；非生物堿部位高、中、低劑量組以非生物堿部位溶液(120，60，30 mg/kg)灌服；陽(yáng)性藥對(duì)照組以雷公藤多苷片混懸液(9.

3、45 mg/kg)灌服；空白對(duì)照組、模型對(duì)照組以0.5%的CMC-Na水溶液灌服。連續(xù)灌胃給藥21天，于末次給藥2 h后對(duì)大鼠進(jìn)行相應(yīng)處理。
　　4.采用HE染色、關(guān)節(jié)腫脹度、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)、體重等指標(biāo)對(duì)大鼠AA模型制備進(jìn)行評(píng)價(jià)，并利用上述指標(biāo)觀察伏毛鐵棒錘有效部位對(duì)AA大鼠的治療作用。
　　5.利用ELISA法檢測(cè)AA大鼠血清中的IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-17及TNF-α的含量；免疫組化法

4、(Immunohistochemistry,IHC)觀察血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vasc ular endothelial growth factor,VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶-3(Matrixmetalloproteinases-3,MMP-3)在滑膜組織中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.伏毛鐵棒錘干燥塊根3kg經(jīng)提取后得到了粗提浸膏0.3 kg，大孔吸附樹(shù)脂富集到了30%醇部位12.3g，得率為4.1%；取30%醇部位浸膏8 g，通過(guò)

5、陽(yáng)離子交換樹(shù)脂分離，得到非生物堿部位4g，得率為50%。
　　2.伏毛鐵棒錘原藥材中總黃酮含量為1.2%，大孔吸附樹(shù)脂30%乙醇洗脫部位中總黃酮含量為9.6%；經(jīng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂分離，得到的非生物堿有效部位總黃酮含量為29.26%。
　　3.蒙花苷(0.05，0.01mg/kg)，30%醇部位(3.12 g/kg)可明顯抑制ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)(p<0.05)。
　　4.伏毛鐵棒錘大孔吸附樹(shù)脂30%醇部位

6、(60，30 mg/k g)、非生物堿部位中劑量組(60 mg/k g)灌服，可減輕 AA大鼠繼發(fā)性足腫脹(p<0.05)，顯著降低大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)(p<0.05)，緩解AA大鼠體重的下降(p<0.05)，同時(shí)明顯減輕病變關(guān)節(jié)滑膜炎癥與增生、防止關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)的破壞。
　　5.伏毛鐵棒錘30%醇部位(60，30 mg/kg)、非生物堿部位中劑量組(60 mg/kg)抑制AA大鼠血清中炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-4、IL-5、

7、TNF-α、IL-6分泌(p<0.05)，提高I L-2、IL-17含量(p<0.05)。
　　6.伏毛鐵棒錘大孔吸附樹(shù)脂30%乙醇洗脫部位(60，30 mg/k g)，非生物堿部位中劑量組(60 mg/kg)可下調(diào) VEGF在血管壁的表達(dá)(p<0.05)，減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管豁的新生，下調(diào)滑膜組織中MMP-3表達(dá)。
　　結(jié)論：1.伏毛鐵棒錘非生物堿有效部位發(fā)揮治療作用的主要成分可能是黃酮類成分。2.伏毛鐵棒錘有效部位