應用表面活性劑及磷脂酶制作豬脫細胞角膜基質(zhì)的研究.pdf

1、中山大學博士學位論文應用表面活性劑及磷脂酶制作豬脫細胞角膜基質(zhì)的研究姓名：周楊申請學位級別：博士專業(yè)：眼科學指導教師：王智崇20090524◇中山大學博士學位論文應用表面活性劑及磷脂酶制作豬脫細胞角膜基質(zhì)的研究(TritonX100組)一單獨使用TritonX100處理角膜片，溶液濃度設(shè)定為01％、025％及05％，作用時間為6dH寸、12d“時及24d時；以不同的濃度及作用時間進行組合，共分為9組；實驗組(SDS組)一室溫卜使用SDS

2、處理角膜，溶液濃度設(shè)為005％、01％及05％，作用時問64時、12d時、24d時，亦分為9組：實驗網(wǎng)組一根據(jù)對上述實驗三組結(jié)果的觀察，選擇濃度為0I％SDS在37℃下分別作用29d時，每l小時作為1個觀察點，共分為8組；組織學檢查顯示以濃度為01％的SDS溶液在37℃處理7d時后，角膜原有的三維顯微空問結(jié)構(gòu)保留良好，基質(zhì)片內(nèi)無細胞成分殘留；遂以此處理條件得到的脫細胞角膜片(SDS弋ACM組)進行后續(xù)檢測；2脫細胞角膜基質(zhì)物理學特性的鑒

3、定：從SDSCACM，ADMCACM，PBS—CACM三組中，每組隨機抽取相同厚度的12只角膜基質(zhì)片，分別將三組植片固定于紫外一可見光譜儀密閉的樣品倉中，選擇250nm800nm作為觀測的波長范圍，連續(xù)測定兩組植片的透光率；每組隨機抽取24只角膜基質(zhì)，置于50℃烘箱里烘干24小時，電子天平測其恒重G，后浸入PBS緩沖液，在角膜片吸水后的不同時段取出，稱重為G1；吸水率測量分為二組，每組12只。第一組測量時間持續(xù)2小時，每問隔lO分鐘測量

4、1次；第二組測量持續(xù)時間12小時，每間隔l小時測量1次，計算吸水率；上述三組角膜片按lcm2試樣表面積加lOmL細胞培養(yǎng)液的比例在37。C的培養(yǎng)箱內(nèi)浸提24小時，用MTT法評價各組植片對細胞生長活性的影響。3脫細胞基質(zhì)力學特性的鑒定：模擬正常角膜的結(jié)構(gòu)制作力學模具，從SDS—CACM，ADM—CACM，PBS。CACM三組和空白組中每組隨機抽取12只角膜基質(zhì)，通過充氣一破裂實驗的結(jié)果，選擇SDSCACM，PBS—CACM和空白組角膜片每

5、組12只進行應力一應變實驗，將拍攝所得數(shù)據(jù)輸入電腦，測量并計算逐漸加壓后角膜中央?yún)^(qū)標記范圍內(nèi)的面積變化，計算在5、15、30、50mmltg壓力差(P’)時角膜片面模量(E)的變化，分析并比較不同組別角膜植片的應力一應變關(guān)系的差異。4異種角膜基質(zhì)層問植入術(shù)后透明性的恢復：成年新西蘭大白兔60只，SDS—CACM組脫細胞角膜片30只，實驗組30只眼，右眼行角膜基質(zhì)層間異種材料植入手術(shù)，陰性對照組30只眼，右眼僅行角膜基質(zhì)板層分離術(shù)。異種植