藏藥甘青烏頭抗菌、抗腫瘤活性研究以及兔耳草抗病毒活性研究.pdf

1、目的： 對(duì)單味藏藥甘青烏頭提取物以及復(fù)方十八味訶子利尿丸進(jìn)行了抑菌作用研究；深入考察了兔耳草提取物體內(nèi)外抗HSV-2病毒活性及其機(jī)制；初步檢測(cè)了甘青烏頭生物堿類提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。通過實(shí)驗(yàn)篩選出具有抗菌、抗病毒以及抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性部位。 方法： 本研究采用有機(jī)溶劑提取法得到甘青烏頭和兔耳草全草的提取物。采用瓊脂擴(kuò)散法和微量稀釋法以抑菌圈和最小抑菌濃度為指標(biāo)對(duì)單味甘青烏頭乙醇總提取物、揮發(fā)油以及生

2、物堿類提取物和藏藥復(fù)方十八味訶子利尿丸進(jìn)行了體外抑菌活性研究。采用MTT法結(jié)合CPE法測(cè)定兔耳草乙醇總提取物和總皂苷對(duì)Vero細(xì)胞的毒性，以ACV為陽(yáng)性對(duì)照采用空斑減少法結(jié)合定量熒光PCR法考查了兔耳草乙醇總提取物和總皂苷體外抗HSV-2病毒活性及其機(jī)制。通過建立HSV-2病毒小鼠腦炎模型和生殖器模型對(duì)兔耳草乙醇總提取物和總皂苷體內(nèi)抗病毒活性進(jìn)行了初步探討。采用SRB法檢測(cè)了甘青烏頭生物堿類提取物對(duì)肝癌細(xì)胞HepG-2和肺癌細(xì)胞lewi

3、s增殖的抑制作用。 結(jié)果： 抗菌活性研究顯示：?jiǎn)挝恫厮幐是酁躅^乙醇總提取物、揮發(fā)油以及生物堿類提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、耐藥表皮葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、糞腸球菌、大腸埃希菌、銅綠假單孢桿菌和白色念珠菌均形成了直徑范圍為9～19 mm的抑菌圈，提取物對(duì)各種菌種的MIC范圍為0.125～25.00 mg/ml。藏藥復(fù)方十八味訶子利尿丸對(duì)實(shí)驗(yàn)菌種具有抑制作用，形成直徑范圍為8～19 mm大小的抑菌圈，對(duì)各種菌的MI

4、C范圍為3.125～50 mg/ml。 抗病毒活性研究：兔耳草乙醇總提取物、總皂苷和陽(yáng)性對(duì)照ACV對(duì)Vero細(xì)胞的半數(shù)中毒濃度TC50分別為0.2103 mg/ml、0.1127mg/ml和11.02mg/ml，對(duì)病毒直接殺滅的半數(shù)有效濃度EC50分別為0.08825mg/ml、0.03255mg/ml和0.2529mg/ml，治療指數(shù)TI分別為2.4、3.5和44.3。抑制病毒侵入細(xì)胞作用的半數(shù)有效濃度EC50分別為0.147

5、8mg/ml、0.09333mg/ml和0.2105mg/ml，治療指數(shù)TI分別為1.4、1.2和52.4。兔耳草乙醇總提取物、總皂苷對(duì)小鼠灌胃的LD50分別為1.27g/kg和0.5g/kg。0.125g/kg劑量組明顯延長(zhǎng)了小鼠的平均存活時(shí)間，總皂苷在該劑量組對(duì)小鼠的保護(hù)率為10％。生殖器感染小鼠給藥一周后，小鼠生殖器皰疹病變出現(xiàn)好轉(zhuǎn)，兩周后小鼠基本康復(fù)。 抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性研究：甘青烏頭脂溶性生物堿和水溶性生物堿對(duì)Hep

6、G-2細(xì)胞和Lewis細(xì)胞均具有明顯的抑制作用，抑制作用隨藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。 結(jié)論： 抗菌活性研究：?jiǎn)挝恫厮幐是酁躅^各種提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)菌種抑制作用：揮發(fā)油成分>水溶性生物堿>脂溶性生物堿>乙醇總體提取物。各種提取物對(duì)革蘭陽(yáng)性(G+)菌的抑制效應(yīng)比革蘭陰性(G-)菌顯著一些。對(duì)耐藥菌和真菌效果最好，尤其是生物堿類該特性非常突出。藏藥復(fù)方十八味訶子利尿丸對(duì)革蘭陽(yáng)性(G+)菌比對(duì)革蘭陰性(G-)菌的抑制作用強(qiáng)

7、，對(duì)白色念珠菌抑制效果最好。 抗病毒活性研究：對(duì)HSV-2的直接殺滅和病毒侵入細(xì)胞的阻斷作用是兔耳草乙醇總提取物和總皂苷體外抗病毒的主要作用途徑。提取物高劑量治療組對(duì)HSV-2病毒引起的小鼠腦炎和生殖器感染有一定的治療作用。 抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性研究：甘青烏頭脂溶性生物堿和水溶性生物堿對(duì)HepG-2細(xì)胞和Lewis細(xì)胞均具有明顯的抑制作用且抑制作用隨藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，其中水溶性生物堿比脂溶性生物堿的抑