藏藥甘青烏頭抗菌、抗腫瘤活性研究以及兔耳草抗病毒活性研究.pdf

1、目的： 對單味藏藥甘青烏頭提取物以及復方十八味訶子利尿丸進行了抑菌作用研究；深入考察了兔耳草提取物體內外抗HSV-2病毒活性及其機制；初步檢測了甘青烏頭生物堿類提取物對腫瘤細胞增殖的抑制作用。通過實驗篩選出具有抗菌、抗病毒以及抑制腫瘤細胞增殖的活性部位。 方法： 本研究采用有機溶劑提取法得到甘青烏頭和兔耳草全草的提取物。采用瓊脂擴散法和微量稀釋法以抑菌圈和最小抑菌濃度為指標對單味甘青烏頭乙醇總提取物、揮發(fā)油以及生

2、物堿類提取物和藏藥復方十八味訶子利尿丸進行了體外抑菌活性研究。采用MTT法結合CPE法測定兔耳草乙醇總提取物和總皂苷對Vero細胞的毒性，以ACV為陽性對照采用空斑減少法結合定量熒光PCR法考查了兔耳草乙醇總提取物和總皂苷體外抗HSV-2病毒活性及其機制。通過建立HSV-2病毒小鼠腦炎模型和生殖器模型對兔耳草乙醇總提取物和總皂苷體內抗病毒活性進行了初步探討。采用SRB法檢測了甘青烏頭生物堿類提取物對肝癌細胞HepG-2和肺癌細胞lewi

3、s增殖的抑制作用。 結果： 抗菌活性研究顯示：單味藏藥甘青烏頭乙醇總提取物、揮發(fā)油以及生物堿類提取物對金黃色葡萄球菌、耐藥表皮葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、糞腸球菌、大腸埃希菌、銅綠假單孢桿菌和白色念珠菌均形成了直徑范圍為9～19 mm的抑菌圈，提取物對各種菌種的MIC范圍為0.125～25.00 mg/ml。藏藥復方十八味訶子利尿丸對實驗菌種具有抑制作用，形成直徑范圍為8～19 mm大小的抑菌圈，對各種菌的MI

4、C范圍為3.125～50 mg/ml。 抗病毒活性研究：兔耳草乙醇總提取物、總皂苷和陽性對照ACV對Vero細胞的半數中毒濃度TC50分別為0.2103 mg/ml、0.1127mg/ml和11.02mg/ml，對病毒直接殺滅的半數有效濃度EC50分別為0.08825mg/ml、0.03255mg/ml和0.2529mg/ml，治療指數TI分別為2.4、3.5和44.3。抑制病毒侵入細胞作用的半數有效濃度EC50分別為0.147

5、8mg/ml、0.09333mg/ml和0.2105mg/ml，治療指數TI分別為1.4、1.2和52.4。兔耳草乙醇總提取物、總皂苷對小鼠灌胃的LD50分別為1.27g/kg和0.5g/kg。0.125g/kg劑量組明顯延長了小鼠的平均存活時間，總皂苷在該劑量組對小鼠的保護率為10％。生殖器感染小鼠給藥一周后，小鼠生殖器皰疹病變出現好轉，兩周后小鼠基本康復。 抑制腫瘤細胞增殖活性研究：甘青烏頭脂溶性生物堿和水溶性生物堿對Hep

6、G-2細胞和Lewis細胞均具有明顯的抑制作用，抑制作用隨藥物濃度的增加和作用時間的延長而增強。 結論： 抗菌活性研究：單味藏藥甘青烏頭各種提取物對實驗菌種抑制作用：揮發(fā)油成分>水溶性生物堿>脂溶性生物堿>乙醇總體提取物。各種提取物對革蘭陽性(G+)菌的抑制效應比革蘭陰性(G-)菌顯著一些。對耐藥菌和真菌效果最好，尤其是生物堿類該特性非常突出。藏藥復方十八味訶子利尿丸對革蘭陽性(G+)菌比對革蘭陰性(G-)菌的抑制作用強

7、，對白色念珠菌抑制效果最好。 抗病毒活性研究：對HSV-2的直接殺滅和病毒侵入細胞的阻斷作用是兔耳草乙醇總提取物和總皂苷體外抗病毒的主要作用途徑。提取物高劑量治療組對HSV-2病毒引起的小鼠腦炎和生殖器感染有一定的治療作用。 抑制腫瘤細胞增殖活性研究：甘青烏頭脂溶性生物堿和水溶性生物堿對HepG-2細胞和Lewis細胞均具有明顯的抑制作用且抑制作用隨藥物濃度的增加和作用時間的延長而增強，其中水溶性生物堿比脂溶性生物堿的抑