小鼠鼠痘診斷方法的研究及其綜合防制.pdf

1、運用電鏡技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)對某實驗動物中心發(fā)生的小鼠鼠痘進(jìn)行診斷，為實驗小鼠鼠痘的診斷以及制定綜合防制措施提供理論依據(jù)和參考。 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明：因運輸和氣候變化引起鼠群突然發(fā)病，幼齡鼠及繁育高峰種鼠易感染發(fā)病，雄性鼠較雌性鼠易感，而老齡鼠不易感。且外觀癥狀不典型，病期極少見小鼠頭部、四肢和尾部潰瘍。肝、脾、十二指腸和小腸出血、腫脹和壞死等病變較為典型。 動物感染性試驗：分別將發(fā)病即將死亡的小鼠肝、肺、

2、脾、腎臟等病理組織經(jīng)碾磨制成細(xì)胞懸液，以腹腔注射的方式將病毒接種到BALB/c小鼠和KM小鼠、Wistar大鼠和家兔體內(nèi)，接種后第五天，感染小鼠全部死亡。接種后2周，大鼠和兔未表現(xiàn)出異常。結(jié)果表明：鼠痘病毒感染并致死BALB/c小鼠和KM小鼠，且BALB/c小鼠感染后的病理變化比KM小鼠更為典型。而鼠痘病毒不感染W(wǎng)istar大鼠和家兔。 將病死鼠肝、肺、腎、脾和腸等內(nèi)臟組織，經(jīng)戊二醛固定、制片，透射電鏡觀察。結(jié)果顯示在肝、肺、腎

3、、脾和腸的組織細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均有大量的卵圓形病毒顆粒，其核心呈啞鈴狀。 將收集的病變肝、脾組織分別放入勻漿器中反復(fù)碾磨、離心分離提純，進(jìn)行負(fù)染后電鏡觀察，結(jié)果觀察到大量的病毒顆粒，形狀為卵圓形或磚形，其大小為160-190×250-300nm。 自然感染和人工感染發(fā)病的小鼠肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、胰、腸等組織常規(guī)H．E染色，光鏡可觀察到自然感染和人工感染鼠痘小鼠主要組織病理變化均表現(xiàn)為脾臟淤血，局灶性壞死和紅髓中多核巨細(xì)胞顯著

4、增多；肝臟局灶性壞死，門管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤，出現(xiàn)多核巨細(xì)胞；腸表現(xiàn)為出血性壞死性腸炎特征：大腦可見小膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)節(jié)；心臟、肺臟、腎臟和胰臟表現(xiàn)局部的淤血、出血和細(xì)胞壞死。 采集發(fā)病后47天存活小鼠的血清20份，用ELISA試驗方法進(jìn)行抗體檢測，結(jié)果陽性率達(dá)到100％。 從感染鼠的不同組織中提取病毒核酸，用痘病毒基因組中A－型包涵體蛋白基因作為靶基因，設(shè)計合成一對引物，PCR檢測技術(shù)進(jìn)行分析，結(jié)果表明該DNA片段的核苷酸序列與

5、鼠脫腳病病毒的A一型包涵體蛋白基因序列同源性高達(dá)98.6％。 經(jīng)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、動物感染試驗、電鏡觀察、組織病理學(xué)觀察、血清學(xué)試驗以及PCR技術(shù)檢測分析進(jìn)一步鑒定表明，該鼠群發(fā)病為急性型流行性鼠痘。 根據(jù)鼠痘的流行特點，結(jié)合實驗室診斷方法，提出鼠痘診斷要點：對于急性型鼠痘建議采取臨床病變和電鏡檢查病原的診斷方法；對于典型鼠痘（亞急性型）應(yīng)根據(jù)臨床癥狀和病理學(xué)變化可以做出診斷；對于流行后期的慢性型則采用ELI