副豬嗜血桿菌多位點(diǎn)序列分型及其密度感應(yīng)信號(hào)分子初步鑒定.pdf

1、副豬嗜血桿菌（HPS）是豬格拉澤氏病的病原菌，可以引起多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎，給豬群造成較高的發(fā)病率與死亡率。雖然目前血清分型鑒定了副豬嗜血桿菌的15個(gè)血清型，但仍然存在大量的不可分型菌株，這極大地限制了流行病學(xué)及種群結(jié)構(gòu)分析，有必要通過MLST等基因分型方法對(duì)我國(guó)副豬嗜血桿菌進(jìn)行分類。
　　細(xì)菌生物被膜是造成副豬嗜血桿菌定植及耐藥的主要原因，密度感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控生物被膜的形成，可能與副豬嗜血桿菌的致病機(jī)制相關(guān)，而目前尚未有對(duì)于

2、副豬嗜血桿菌密度感應(yīng)系統(tǒng)的報(bào)道，故對(duì)副豬嗜血桿菌密度感應(yīng)系統(tǒng)信號(hào)分子的研究有助于揭示該菌的致病機(jī)制。
　　本研究對(duì)50株副豬嗜血桿菌田間分離株和15株參考株進(jìn)行了MLST分型，共發(fā)現(xiàn)了26個(gè)新的等位基因序列和29個(gè)新的ST型，這極大地豐富了副豬嗜血桿菌MLST數(shù)據(jù)庫。BURST分析表明副豬嗜血桿菌缺乏穩(wěn)定的種群結(jié)構(gòu)，具有較高異質(zhì)性；ST型與地理位置之間也不存在關(guān)聯(lián)。UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹將所有的菌株分為兩大組，A組和B組，存在于A組

3、的菌株所屬的血清型基本為無毒或弱毒，B組趨向于強(qiáng)毒菌株。
　　利用密度感應(yīng)系統(tǒng)Ⅰ型信號(hào)分子報(bào)告菌CV026和KYC55，對(duì)生物被膜形成能力較強(qiáng)的副豬嗜血桿菌田間分離株H19是否產(chǎn)生AHL類信號(hào)分子進(jìn)行了定性檢測(cè)，進(jìn)而利用HPLC-MS-MS對(duì)副豬嗜血桿菌H19培養(yǎng)上清中存在的Ⅰ型信號(hào)分子進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)副豬嗜血桿菌所合成的Ⅰ型信號(hào)分子共有兩種，其相對(duì)分子質(zhì)量與C10-HSL和C12-HSL相同，但結(jié)構(gòu)不同，由于確定其結(jié)構(gòu)需要進(jìn)行大量

4、提取純化，而H19產(chǎn)生的信號(hào)分子量極少，因此未能對(duì)其結(jié)構(gòu)作進(jìn)一步鑒定。兒茶酸具有抑制密度感應(yīng)機(jī)制的作用，兒茶酸對(duì)副豬嗜血桿菌生物被膜形成的試驗(yàn)結(jié)果表明，兒茶酸使副豬嗜血桿菌H19生物被膜形成能力降低25.4％。
　　利用自殺質(zhì)粒pK18mobsacB通過同源重組方法，成功構(gòu)建了副豬嗜血桿菌H19的ΔRbsB基因缺失突變株及其回復(fù)株，并進(jìn)行了生物被膜形成能力檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)ΔRbsB基因缺失突變株生物被膜形成能力降低，而回復(fù)株生物被膜形成