病毒唑?qū)Σ《拘孕募⊙庄熜Ъ皺C(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的： 病毒性心肌炎(Viralmyocarditis,VM)是兒科常見的后天性心血管疾病之一，可由多種病毒引起，其中柯薩奇病毒B組(CoxsackievirusB，CVB)最常見，約占50％以上。其病理變化主要是心肌廣泛或散在的細(xì)胞壞死及周圍間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)。近年來此病發(fā)病率有所增多，大多數(shù)患者可以完全恢復(fù)正常心功能，少數(shù)患者臨床癥狀可以改善但會(huì)遺留心功能不全，少數(shù)患者進(jìn)行性心臟擴(kuò)大，慢性心力衰竭、死亡或需要心臟移植。該

2、病發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，一般認(rèn)為病毒的直接損傷作用和免疫異常(包括病毒誘導(dǎo)的免疫和自身免疫反應(yīng))參與了病毒性心肌炎的發(fā)病過程。因此，病毒性心肌炎的治療重點(diǎn)一是抗病毒治療，二是阻斷免疫反應(yīng)對(duì)心肌細(xì)胞的損害，但對(duì)該疾病至今尚無特效療法。本研究以柯薩奇病毒B3腹腔注射純系Balb/c小鼠，制備VM模型，來探討病毒唑?qū)M小鼠的作用機(jī)制和療效。 材料與研究方法： 取120只4周齡Balb/c健康雄性小鼠，體重為15～20克，

3、用隨機(jī)數(shù)字法均分為3組，每組40只，包括：空白對(duì)照組(A組)、病毒對(duì)照組(B組)、病毒唑治療組(C組)，B、C組每只小鼠均腹腔接種Nancy株CVB3病毒液0.2ml(10-5TCID50/ml)，A組小鼠腹腔接種不含病毒的Eagle's液0.2ml。C組小鼠接種病毒后24小時(shí)開始給病毒唑0.3mg/g·d，每日2次灌胃，A、B組給生理鹽水0.15ml，每日2次灌胃。接種病毒后7、14、21天各分別處死10只，摘眼球取血，無菌條件下取心

4、臟，分別觀察以下指標(biāo)： 1.心臟石蠟包埋后切片，做常規(guī)HE染色，光鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)改變，計(jì)算心肌病理積分，同時(shí)透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)的改變。 2.采用PFU法測(cè)定心肌病毒滴度。 3.應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)血清肌鈣蛋白I(cTnI)的水平。 4.采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法以結(jié)合指數(shù)(BI)的方式定量檢測(cè)血清抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)水平。 5.流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞

5、群(CD4、CD8)。 研究結(jié)果： 1.心肌病理改變：空白對(duì)照組小鼠無死亡，心肌組織形態(tài)無異常，病毒對(duì)照組小鼠死亡10只，占25.0％，病毒唑治療組小鼠死亡7只，占17.5％，且兩組小鼠心肌均出現(xiàn)不同程度的病理改變：病毒對(duì)照組小鼠7天時(shí)心肌已出現(xiàn)病變,14天時(shí)達(dá)高峰，21天漸恢復(fù)。病毒唑治療組小鼠心肌病理損害程度輕于病毒對(duì)照組。 2.心肌病毒滴度的變化：空白對(duì)照組小鼠心肌病毒滴度為0，病毒對(duì)照組和病毒唑治療組在C

6、VB3感染后7天小鼠心肌病毒滴度達(dá)高峰,14天后即開始下降，病毒唑治療組小鼠心肌病毒滴度低于病毒對(duì)照組。7天時(shí)小鼠心肌病毒滴度與心肌病理積分呈顯著正相關(guān)(r=0.64P＜0.05)，而14天時(shí)二者無顯著相關(guān)性。 3.血清肌鈣蛋白I(cTnI)水平：空白對(duì)照組小鼠血清肌鈣蛋白I(cTnI)水平極微量，病毒對(duì)照組和病毒唑治療組小鼠在CVB3感染7天后，血清cTnI水平即明顯升高，14天時(shí)達(dá)高峰，隨后開始降低，漸恢復(fù)正常，病毒唑治療組

7、cTnI水平明顯低于病毒對(duì)照組。14天時(shí)，小鼠血清cTnI與心肌病理積分呈顯著正相關(guān)(r=0.70P＜0.01)。 4.血清抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)和外周血T細(xì)胞亞群CD4、CD8水平：病毒對(duì)照組和病毒唑治療組小鼠血清ACA-IgGBI顯著高于空白對(duì)照組小鼠，外周血T細(xì)胞亞群CD4、CD8顯著低于空白對(duì)照組；應(yīng)用病毒唑治療后可顯著降低ACA-IgGBI水平。 結(jié)論： 1.病毒性心肌炎小鼠心肌有明顯病理

8、改變，心肌病毒滴度顯著升高，血清cTnI、抗心磷脂抗體(ACA-IgG)顯著升高，并與心肌病理積分呈正相關(guān)。外周血CD4、CD8水平顯著下降。 2.病毒唑能降低病毒性心肌炎小鼠的病死率、心肌病理積分、心肌病毒滴度及血清cTnI的水平，可見病毒唑?qū)π∈蟛《拘孕募⊙子休^好療效，其機(jī)制主要是通過降低心肌病毒滴度。 3.病毒唑治療心肌炎小鼠后能降低血清抗心磷脂抗體(ACA-IgG)結(jié)合指數(shù)，但不能升高外周血CD4、CD8水平，可