狼瘡方2號對BXSB狼瘡鼠的免疫影響及療效評價.pdf

1、目的:本實驗通過檢測淋巴細胞表面標志CD4、CCR3和CD95來進一步證實SLE的Th2細胞優(yōu)勢學(xué)說及存在的凋亡異常，通過中藥狼瘡方2號(LCF-2)對BXSB狼瘡鼠的藥物干預(yù)實驗，觀察其對Th1/Th2細胞平衡的調(diào)節(jié)作用及其對外周血及脾臟Th2細胞凋亡的影響，探討其可能的作用機理。方法：①選取11-12周齡的BXSB狼瘡鼠18只將它們隨機分成3組，分別用中藥狼瘡方2號、強的松及等量蒸餾水灌胃給藥，前兩組為治療組后一組為狼瘡鼠對照組，同

2、時選取同齡C57BL/6小鼠6只作為正常鼠對照組，并給予等量的蒸餾水灌胃，給藥時間為48天；②分別在給藥前和給藥后第15天、30天、45天時用尿蛋白試紙對各組小鼠進行尿蛋白半定量測定；③在給藥第45天時，所有小鼠眼球內(nèi)眥靜脈處毛細管采血200μl，離心分離血清，用間接免疫熒光法測定ANA滴度；④用流式細胞術(shù)分別測定外周血及脾中CD4+CCR3+CD95+細胞數(shù)⑤將各組小鼠摘眼球放血處死后立即解剖脾臟及胸腺并稱量它們的濕重，計算脾指數(shù)和胸

3、腺指數(shù)，解剖出腎臟并立即放入福爾馬林溶液中固定，進行組織病理檢查。結(jié)果：①與狼瘡鼠對照組相比，強的松組和LCF-2組均可明顯降低尿蛋白含量（P均<0.05），而治療組之間差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.823>0.05），中藥LCF-2的藥效與強的松的差別無顯著性；②ANA滴度的測定結(jié)果顯示:治療組的ANA滴度對數(shù)的數(shù)值（分別為強的松組1.33±0.76，LCF-2組1.44±0.84）均顯著低于狼瘡鼠對照組(2.3±0.46)，治療組之間相

4、比較差異無顯著性（P=0.81>0.05），對于BXSB狼瘡鼠的治療效果相近；③對各組小鼠的脾指數(shù)檢測結(jié)果顯示：狼瘡鼠對照組的脾指數(shù)為0.005517±0.00096，C57BL/6對照組的脾指數(shù)為0.00265±0.00078，前者明顯高于后者（P=0.005<0.01），狼瘡鼠對照組的脾臟比C57BL/6對照組的脾臟明顯增生。LCF-2組脾指數(shù)為0.005467±0.00134，強的松組脾指數(shù)為0.005883±0.002553，兩

5、組與狼瘡鼠對照組相比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義，強的松、LCF-2治療組均沒有抑制脾增生的作用；④各組小鼠的胸腺指數(shù)分析結(jié)果顯示：狼瘡鼠對照組的胸腺指數(shù)是0.0014±0.00559，C57BL/6對照組的胸腺指數(shù)是0.00247±0.00356，前者顯著低于后者（P=0.0003<0.01），提示狼瘡鼠對照組的胸腺較C57BL/6對照組的胸腺萎縮明顯。LCF-2組的胸腺指數(shù)是0.00197±0.00258，強的松組的胸腺指數(shù)是0.0012±0

6、.0055，狼瘡鼠對照組的胸腺指數(shù)是0.0014±0.00559，LCF-2組顯著高于狼瘡鼠對照組（P=0.036<0.05）。強的松組低于狼瘡鼠對照（P=0.031<0.05），提示LCF-2有抑制狼瘡鼠胸腺萎縮的作用，強的松則下調(diào)胸腺指數(shù)，能進一步增加胸腺的萎縮；⑤流式細胞術(shù)測定外周血細胞的CD4+CCR3+CD95+結(jié)果顯示：狼瘡鼠對照組的CD4+CCR3+值為38.05±4.98，C57BL/6對照組的CD4+CCR3+值為30

7、.79±4.57，前者高于后者（P=0.032<0.05）；LCF-2組的CD4+CCR3+值為31.23±5.66，強的松組的CD4+CCR3+值為29.04±6.44，其結(jié)果顯示兩治療組均比狼瘡鼠對照組低（P值均小于0.05），兩治療組CD4+CCR3+值與C57BL/6對照組相比P值均大于0.05（分別是0.584和0.89），提示中西藥治療后的CD4+CCR3+值均接近正常；CD4+CCR3+CD95+的測定結(jié)果數(shù)值多數(shù)為0，表

8、明此次實驗所有小鼠血細胞中存在的凋亡現(xiàn)象均不明顯；⑥流式細胞術(shù)測定脾CD4+CCR3+CD95+結(jié)果顯示：狼瘡鼠對照組的脾CD4+CCR3+值為32.0±3.0，C57BL/6對照組的CD4+CCR3+值為20.72±3.03，前者顯著高于后者（P=0.002<0.01），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；LCF-2組CD4+CCR3+值為14.78±9.7，強的松組CD4+CCR3+值為20.69±3.88，二者均比狼瘡鼠對照組的CD4+CCR3+值

9、明顯降低（P值分別為0.0003和0.002，均小于0.01），其中LCF-2組下降得尤為顯著；兩治療組相比差異無顯著性（P=0.085>0.05），提示兩治療組下調(diào)CD4+CCR3+的作用差異不大；狼瘡鼠對照組的CD4+CCR3+CD95+值為0.43±0.20，C57BL/6對照組的CD4+CCR3+CD95+值為0.18±0.15，前者顯著高于后者（P<0.05）；強的松組的CD4+CCR3+CD95+值為0.65 ±0.17，狼

10、瘡鼠對照組CD4+CCR3+CD95+值為0.43±0.20，前者高于后者（P=0.032<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而LCF-2組的CD4+CCR3+CD95+值為0.27±0.19，與狼瘡鼠對照組比較差異無顯著性（P=0.099）。結(jié)論：①BXSB狼瘡鼠符合Th2細胞優(yōu)勢學(xué)說，并且CCR3作為Th2細胞表面標志可以反映Th2細胞的增減變化。中藥狼瘡方2號與西藥強的松均可以降低Th2細胞的比例；②BXSB狼瘡鼠Th2細胞存在著凋亡

11、的增加。狼瘡方2號沒有明顯的促進凋亡或抑制凋亡的作用，而強的松則可以使得Th2細胞的凋亡進一步增強，促發(fā)凋亡的作用比較明顯。強的松可能是通過促進Th2細胞的凋亡來使Th2細胞比例有所降低，糾正Th1/Th2比例失衡，從而起到治療目的。而LCF-2促進凋亡的作用不明顯，可能是通過其他途徑糾正Th1/Th2比例失衡的；③中西藥治療的最終效果相近。而中藥LCF-2又能抑制狼瘡鼠的胸腺萎縮，減少用藥帶來的副反應(yīng)，其作用機制有待進一步研究；④BX