趨化因子受體CCR4在乳腺癌中的表達(dá)及其作用.pdf

1、研究背景和目的：越來越多的證據(jù)表明,趨化因子及其受體與腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移相關(guān)。趨化因子受體CCR4在維持免疫平衡過程中發(fā)揮重要作用。最近的研究顯示,CCR4在血液系統(tǒng)惡性腫瘤以及原發(fā)胃癌中都扮演一定的角色。但是,CCR4在乳腺癌中的作用還不清楚。本研究的目的是闡明趨化因子受體CCR4在乳腺中的表達(dá)情況,并且探索其在乳腺癌中的作用。
　　方法：應(yīng)用RT-PCR、westernblot和流式細(xì)胞分析等方法檢測(cè)不同人類乳腺癌細(xì)胞CCR4的

2、表達(dá)水平。采用慢病毒包裝的方法獲得CCR4過表達(dá)慢病毒以及CCR4干擾慢病毒。分別感染CCR4表達(dá)水平較低的MDA-MB-231細(xì)胞系和CCR4表達(dá)水平較高的MDA-MB-231肺高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株(MDA-MB-231HM),從而獲得CCR4過表達(dá)的MDA-MB-231/CCR4細(xì)胞株以及CCR4下調(diào)的231HM/CCR4-RNAi細(xì)胞株。在體外實(shí)驗(yàn)中,采用流式細(xì)胞檢測(cè)、CCK-8及細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)等方法來觀察CCR4基因修飾對(duì)乳腺癌細(xì)胞周

3、期分布、增殖能力及對(duì)CCL17趨化反應(yīng)能力的影響。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們首先建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,觀察比較CCR4基因修飾對(duì)移植瘤生長(zhǎng)曲線以及肺轉(zhuǎn)移的影響；用免疫組化的方法標(biāo)記移植瘤內(nèi)新生血管(CD34),計(jì)數(shù)MVD,比較CCR4基因修飾對(duì)移植瘤血管形成的影響；采用ELISA方法,比較移植瘤內(nèi)CCL17和CCL22水平的變化。在人乳腺癌組織的研究中,隨機(jī)選擇復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2003年2月～2006年1月間的483例浸潤(rùn)性乳腺癌

4、患者的組織標(biāo)本,應(yīng)用免疫組化的方法,分析CCR4的表達(dá)情況。采用Kaplan-Meier生存分析以及Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析CCR4的表達(dá)與患者無病生存率及總生存率的關(guān)系。
　　結(jié)果：CCR4在不同的人類乳腺癌細(xì)胞中有不同水平的表達(dá)。并且,在肺高轉(zhuǎn)移潛能的MDA-MB-231HM細(xì)胞株和骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MDA-MB-231-B中,CCR4表達(dá)水平高于野生型MDA-MB-231。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：CCR4基因過表達(dá)或下調(diào)后,細(xì)胞的周期分布

5、、增殖能力沒有改變。而乳腺癌細(xì)胞對(duì)CCL17的趨化反應(yīng)是隨著CCR4基因的上調(diào)而增加,隨著CCR4基因下調(diào)而降低；而體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：1.CCR4過表達(dá)促進(jìn)乳腺癌移植瘤生長(zhǎng)而CCR4下調(diào)可以抑制乳腺癌移植瘤生長(zhǎng)；2.CCR4過表達(dá)細(xì)胞所成移植瘤微血管密度增加而CCR4下調(diào)所成移植瘤微血管密度降低；3.移植瘤中的CCL22和CCL17水平與CCR4的表達(dá)水平正相關(guān)；4.CCR4過表達(dá)促進(jìn)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移而CCR4下調(diào)抑制乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的形成。人

6、乳腺癌組織中的研究結(jié)果顯示,在483例乳腺癌患者中,有100例患者為CCR4陽性,陽性率為20.7％；CCR4的表達(dá)與HER2陽性、腫瘤局部復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移及骨轉(zhuǎn)移相關(guān)聯(lián)。CCR4陽性患者的總生存率和無病生存率較低；多因素分析結(jié)果顯示,CCR4是浸潤(rùn)性乳腺癌患者總生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論：CCR4在人類乳腺癌細(xì)胞系中存在差異性表達(dá)；CCR4的表達(dá)可以促進(jìn)乳腺癌腫瘤的生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移；CCR4狀態(tài)是乳腺癌患者一個(gè)潛在的預(yù)