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文檔簡介
1、目的:采用Survivin反義寡核苷酸(Antisense Oligodeoxynucleotides,ASODN)復(fù)合物抑制Survivin表達(dá),研究其對槲皮素誘導(dǎo)肝癌SSMC-7721細(xì)胞凋亡的影響。 方法:體外培養(yǎng)人肝癌SSMC-7721細(xì)胞,取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分Ⅰ、Ⅱ兩部分:Ⅰ部分分為空白對照組(設(shè)平行組)、等量脂質(zhì)體LipofcctamineTM2000對照組、400nmol/LSODN復(fù)合物組、400nm
2、ol/LASODN復(fù)合物組(設(shè)平行組),轉(zhuǎn)染48h;Ⅱ部分棄掉Ⅰ部分各組培養(yǎng)液,換新指定培養(yǎng)液,分為空白對照組、40umol/L槲皮素組、脂質(zhì)體LipofectamineTM2000組、SODN復(fù)合物組、ASODN復(fù)合物組、ASODN復(fù)合物+40umol/L槲皮素組(聯(lián)合組),孵育細(xì)胞24h后檢測。Ⅰ部分結(jié)束時(shí)采用RT-PCR、細(xì)胞免疫組化染色檢測各組SSMC-7721細(xì)胞Survivin基因表達(dá)變化;Ⅱ部分結(jié)束時(shí)用吖啶橙(Acridi
3、ne Orange,AO)染色法觀察細(xì)胞凋亡時(shí)形態(tài)變化,四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測SSMC-7721細(xì)胞生長抑制率,Annexi-V/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測SSMC-7721細(xì)胞凋亡率,PI單染流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化。 結(jié)果:ASODN復(fù)合物作用肝癌SSMC-7721細(xì)胞48h后能下調(diào)Survivin mRNA及survivin蛋自的表達(dá)(P<0.01);與其他組比較,聯(lián)合組AO染色圖片可觀察到凋亡小體等典型的細(xì)胞凋亡形
4、態(tài)特征變化且凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯增多,并用MTT法、Annexi-V/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測顯示聯(lián)合組細(xì)胞的生長抑制率明顯增高(P<0.01)、細(xì)胞凋亡率提高(P<0.01),PI單染流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)Survivin反義核苷酸能將肝癌細(xì)胞阻滯于G2/M期(P<0.01),槲皮素能將腫瘤細(xì)胞阻滯于S期(P<0.01),聯(lián)合組對腫瘤細(xì)胞G2/M期、S期均有阻滯作用(P<0.01)。 結(jié)論:①肝癌SSMC-7721細(xì)胞高表達(dá)su
5、rvivin蛋白,ASODN復(fù)合物可有效抑制肝癌細(xì)胞Survivin基因的表達(dá)。②ASODN復(fù)合物能夠抑制肝癌SSMC-7721細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡,且對腫瘤細(xì)胞有G2/M期阻滯作用。③槲皮素能夠抑制肝癌SSMC-7721細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡,且對腫瘤細(xì)胞有S期阻滯作用。④ASODN復(fù)合物能增強(qiáng)槲皮素對SSMC-7721細(xì)胞增殖抑制及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,該作用可能與抑制Survivin基因的表達(dá)有關(guān),即ASODN與槲皮素
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