細(xì)菌葉綠素的化學(xué)修飾及其PDT性能研究.pdf

1、光動(dòng)力治療(photodynamic therapy，PDT)被認(rèn)為是自20世紀(jì)80年代以來(lái)在癌癥治療中最具前景的一種新方法。光敏劑是光動(dòng)力治療的核心物質(zhì)，光動(dòng)力療法的提出、發(fā)展及應(yīng)用都是隨著光敏劑的發(fā)展而逐漸完善的。目前，光敏劑還存在著一些缺陷和問(wèn)題，制約著PDT的應(yīng)用。光敏劑治療后，還存有光敏副反應(yīng)，需要一定的避光時(shí)間，其吸收波長(zhǎng)＜700nm，組織穿透深度受限，而PDT治療深部病變或瘤體較大的腫瘤需要具有在紅外/近紅外光區(qū)長(zhǎng)波長(zhǎng)吸收

2、的光敏劑。本論文選擇光合細(xì)菌中的細(xì)菌葉綠素a作為前體，目的在于研究具有在紅外/近紅外光區(qū)長(zhǎng)波長(zhǎng)吸收的穩(wěn)定的金屬細(xì)菌葉綠素a及細(xì)菌葉綠素a的衍生物的合成方法，作為潛在的光敏劑。
　　(1)采用紫外可見(jiàn)光譜，高效液相色譜結(jié)合薄層色譜作為分析手段，得到細(xì)菌葉綠素a提取分離的有效方法:用甲醇從光合細(xì)菌菌體中直接提取，二氧六環(huán)蒸餾水沉淀，經(jīng)硅膠和Sephadex LH-20柱層析分離。
　　(2)采用紫外可見(jiàn)光譜，原子吸收法，紅外光譜

3、結(jié)合核磁共振譜作為分析和表征手段，對(duì)鋅細(xì)菌葉綠素a的合成方法進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征，從而擴(kuò)展到金屬細(xì)菌葉綠素a類(lèi)的合成方法:二氯甲烷/甲醇溶液(1/1，v/v)作為反應(yīng)溶劑，按摩爾比1/80的比例加入脫鎂細(xì)菌葉綠素a和醋酸鹽，加熱，充氮?dú)饣亓鞣磻?yīng)3h。反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)硅膠層析柱分離。結(jié)果表明，這類(lèi)化合物吸收波長(zhǎng)可達(dá)到770 nm左右，有效完善了現(xiàn)有光敏劑的不足。
　　(3)通過(guò)紫外可見(jiàn)光譜結(jié)合核磁共振譜監(jiān)測(cè)分析，得到細(xì)菌葉

4、綠素a的環(huán)酐類(lèi)化合物細(xì)菌紅紫素a丙酯的合成分離方法，并對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。細(xì)菌紅紫素a丙酯的吸收波長(zhǎng)可達(dá)到813 nm，而目前臨床試用的紅紫素類(lèi)光敏劑，多在650～700nm處有一強(qiáng)吸收峰，吸收波長(zhǎng)明顯紅移。
　　(4)通過(guò)紫外可見(jiàn)光譜結(jié)合核磁共振譜監(jiān)測(cè)分析，得到細(xì)菌葉綠素a的N-環(huán)酰胺化合物的合成分離方法，并對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征，其吸收波長(zhǎng)可達(dá)到822 nm。
　　(5) Zn-BPhe a對(duì)HL-60細(xì)胞的PDT處理中

5、分別加入羥基自由基(HR)相對(duì)特異性的淬滅劑甘露醇(D-Mannitol，DM)和單線(xiàn)態(tài)氧(1O2)相對(duì)特異性的淬滅劑疊氮鈉(Sodium azide，SA)，以淬滅Ⅰ型反應(yīng)和Ⅱ型光動(dòng)力反應(yīng)所產(chǎn)生的相應(yīng)活性氧分子(ROS)，并通過(guò)四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法結(jié)合AnnexinⅤ和PI雙染流式細(xì)胞儀的檢測(cè)結(jié)果，研究Zn-BPhe a的光動(dòng)力反應(yīng)及其對(duì)HL-60細(xì)胞死亡方式的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:Zn-BPhe a對(duì)HL-60細(xì)胞的光動(dòng)力反

6、應(yīng)可能以Ⅱ型為主，光動(dòng)力反應(yīng)所產(chǎn)生的1O2以導(dǎo)致細(xì)胞壞死為主，HR以導(dǎo)致細(xì)胞凋亡為主。
　　(6)通過(guò)測(cè)定光動(dòng)力治療前后，HL-60細(xì)胞存活率，膜抗氧化酶活性，膜流動(dòng)性及膜封閉度的變化，研究PDT對(duì)HL-60細(xì)胞膜功能的影響，對(duì)Zn-BPhe a的PDT致細(xì)胞死亡機(jī)理進(jìn)行探討。采用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞的活性，試劑盒測(cè)定Na+，K+-ATP酶活性及丙二醛MDA含量，熒光偏振法測(cè)定細(xì)胞膜流動(dòng)性。結(jié)果表明，HL-60細(xì)胞在進(jìn)行PDT后，