人類卵丘顆粒細(xì)胞microRNA表達(dá)譜的特性microRNA調(diào)節(jié)Notch信號通路與PCOS有關(guān).pdf

1、【背景】多囊卵巢綜合征（PCOS）是育齡女性最常見的生殖內(nèi)分泌綜合征，特點(diǎn)是卵巢多囊，雄激素過多癥、胰島素抵抗和長期不排卵。這是一個多因素、一系列癥狀和體征的綜合征，PCOS不僅與不孕有關(guān)，但也與代謝性疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加，如胰島素抵抗，糖尿病，肥胖。一些遺傳和環(huán)境因素被報(bào)道，可能有助于多囊卵巢綜合征的發(fā)展。卵母細(xì)胞周圍的卵丘顆粒細(xì)胞在不同的方面參與 PCOS的病理生理過程。MicroRNA（MiRNA）作為真核生物體內(nèi)重要的小RNA調(diào)控分子

2、，廣泛參與女性卵泡發(fā)育成熟、受精、著床及早期胚胎發(fā)育等過程，對維持女性正常生育功能起著不可替代的作用。一些研究已經(jīng)證明miRNA在卵丘顆粒細(xì)胞轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。然而，由于miRNA對于調(diào)控下游靶基因及具體的網(wǎng)絡(luò)作用尚未明確，對miRNA在顆粒細(xì)胞中的作用機(jī)制及靶基因的確定有待于進(jìn)一步研究。
　　【目的】旨在研究分析PCOS患者中差異表達(dá)的 miRNA，及其影響 PCOS的下游靶信號通路。
　　【方法】（1）臨床資

3、料的收集及分析收集2013年1月-2014年3月于安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院生殖中心行因男方因素行 ICSI-ET長方案助孕的 PCOS患者的作為實(shí)驗(yàn)研究組（n=21），同時(shí)收集同期行 ICSI助孕的卵巢功能正?；颊咦鳛閷?shí)驗(yàn)對照組（n=20）。分析比較兩組間的年齡、體重指數(shù)、基礎(chǔ)性激素五項(xiàng)、胰島素、血糖等。
　?。?）顆粒細(xì)胞miRNA的實(shí)驗(yàn)研究1）收集實(shí)驗(yàn)研究組及實(shí)驗(yàn)對照組的卵丘顆粒細(xì)胞2）利用新一代高通量測序技術(shù)（NGS）Ill

4、umina Hiseq2000和CPSS工具對小RNA進(jìn)行深度測序及數(shù)據(jù)分析。3）檢測兩組顆粒細(xì)胞miRNA的表達(dá)圖譜，并比較分析差異表達(dá)的miRNA。4）對差異表達(dá)miRNA的下游靶基因進(jìn)行預(yù)測，然后運(yùn)用Gene Ontology（GO）和KEGGPathway analysis軟件對其潛在的下游調(diào)控通路進(jìn)行富集和篩選。5）運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR、Western Blot對PCOS患者差異表達(dá)miRNA的表達(dá)及預(yù)測的調(diào)控通路進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

5、驗(yàn)證。
　　【結(jié)果】（1）臨床資料的回顧性分析年齡、雌激素（E2）、泌乳素（PRL）、卵泡刺激素（FSH）在PCOS組跟正常對照組之間沒有差異；而PCOS組中體重指數(shù)（BMI）、睪酮（T）、黃體生成素（LH）、胰島素（INS）、血糖（Glu）均顯著高于正常組。
　?。?）顆粒細(xì)胞miRNA的實(shí)驗(yàn)研究1）通過對兩顆粒細(xì)胞小RNA深度測序及分類，發(fā)現(xiàn)有59種已知的miRNA在PCOS組中差異表達(dá)，包括21種上調(diào)的miRNA和38

6、種下調(diào)的miRNA；2）兩組中新發(fā)現(xiàn)的miRNA(Novel miRNA)；3）由GO和KEGG通路分析miRNA在PCOS的病理生理潛在的調(diào)控機(jī)制及幾個重要的被確定由差異表達(dá)的miRNA靶向調(diào)控的過程，如Notch信號通路，調(diào)節(jié)激素，能量代謝和谷氨酸脫氫酶活性；4）此外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，Notch信號和ERK MAPK信號通路被證明是由差異表達(dá)的miRNA如mir-483-5p調(diào)節(jié)。
　　【結(jié)論】我們的數(shù)據(jù)表明，miRNA及其靶向途徑（