血管過(guò)氧化物酶1介導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓血管重構(gòu)及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分VPO1水平與肺動(dòng)脈高壓的相關(guān)性
　　目的:
　　肺動(dòng)脈高壓(pulmonaryarterialhypertension，PAH)是一類(lèi)以肺動(dòng)脈壓力升高為特征的臨床疾病，大量研究證實(shí)，氧化應(yīng)激與PAH的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。PAH發(fā)病時(shí)存在氧化和抗氧化系統(tǒng)調(diào)節(jié)紊亂，導(dǎo)致活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)增多和/或抗氧化能力降低，使得ROS通過(guò)多種途徑介導(dǎo)組織及細(xì)胞損傷。血管過(guò)氧化物酶(vascu

2、larperoxidase，VPO)是新發(fā)現(xiàn)的含血紅素的過(guò)氧化物酶家族成員，可催化H2O2（弱氧化劑）生成HOCl（強(qiáng)氧化劑）增強(qiáng)氧化應(yīng)激效應(yīng)，在血管組織中的表達(dá)以VPO1為主?；谘趸瘧?yīng)激在PAH發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要作用及VPO1促氧化應(yīng)激作用，本研究旨在整體水平初步探討VPO1與肺動(dòng)脈高壓的相關(guān)性。
　　方法:
　　共納入59名PAH患者及43名健康體檢者，所有PAH患者均完善右心導(dǎo)管及其他相關(guān)檢查，采用WesternB

3、lot方法檢測(cè)血清中VPO1水平。比較兩組之間血清VPO1水平變化。
　　結(jié)果:
　　PAH患者血清VPO1濃度為127.46±7.47ng/ml，顯著高于健康對(duì)照組(89.94±7.91ng/μl，p＜0.01)，總?cè)巳褐醒錠PO1的濃度分布范圍為12.75～397.74ng/μl。
　　結(jié)論:
　　血清VPO1水平與肺動(dòng)脈高壓發(fā)生發(fā)展可能相關(guān)。
　　第二部分VPO1介導(dǎo)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖

4、
　　目的:
　　肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖導(dǎo)致的肺血管重構(gòu)是PAH發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。研究表明氧化應(yīng)激與肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖密切相關(guān)。基于VPO1可以通過(guò)催化H2O2生成HOCl并增強(qiáng)氧化應(yīng)激效應(yīng)的能力，本研究擬在原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞結(jié)合工具藥和基因沉默技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞增殖指標(biāo)、VPO1表達(dá)、H2O2及HOCl水平，確證VPO1介導(dǎo)氧化應(yīng)激促肺動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞增殖作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　提取原代大鼠肺

5、動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，予以低氧處理(3％O2，5％CO2，92％N，37℃，24h);以BrdU參入法檢測(cè)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖指標(biāo);以WesternBlot法檢測(cè)細(xì)胞中VPO1、id1等蛋白的表達(dá);以Real-timePCR法檢測(cè)細(xì)胞中VPO1、id1等mRNA含量;以ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中H2O2的含量;利用Nox特異性抑制劑DPI、H2O2特異性水解酶(catalase)及VPO1抑制劑ABAH等工具藥初步確定Nox/H2O2/H

6、OCl/id1信號(hào)途徑，在此基礎(chǔ)上，以siRNA沉默肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中VPO1表達(dá)，觀(guān)察其對(duì)低氧所致細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)低氧處理(3％O2)能顯著誘導(dǎo)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖;預(yù)先予以DPI、Catalase、ABAH能抑制低氧處理的誘導(dǎo)增殖效應(yīng)。
　　(2)低氧處理(3％O2)能顯著誘導(dǎo)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞VPO1、id1蛋白及mRNA水平，能顯著提高細(xì)胞培養(yǎng)液中H2O2及細(xì)胞中HOCl水平。預(yù)先予以DP

7、I、Catalase、ABAH能削弱低氧處理后細(xì)胞VPO1、id1蛋白及mRNA、細(xì)胞培養(yǎng)液中H2O2及HOCl水平的改變。
　　(3)利用siRNA技術(shù)能成功抑制原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中VPO1表達(dá)水平;沉默原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中VPO1能顯著抑制低氧處理(3％O2)誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖效應(yīng)及降低細(xì)胞中id1蛋白及mRNA、細(xì)胞培養(yǎng)液中HOCl水平。
　　結(jié)論:
　　低氧處理可上調(diào)VPO1表達(dá)水平，VPO1可通過(guò)介導(dǎo)Nox/