QAMS法測定穿心蓮中二萜內(nèi)酯含量及成分配伍對其抗腫瘤活性的影響.pdf

1、目的:
　　建立同時測定穿心蓮提取物中多種二萜內(nèi)酯含量的一測多評方法;建立測定穿心蓮提取物中總黃酮含量的方法。穿心蓮有效部位及有效部位中有效成分配伍對抗腫瘤活性的影響，發(fā)現(xiàn)穿心蓮中抗腫瘤有效成分和最優(yōu)成分配伍。
　　方法:
　　以DDA為指標(biāo)，HPLC法同時測定穿心蓮提取物中A、GDA、DOA、NA和DA含量的基礎(chǔ)上，測定與其他五種成分的相對校正因子(RCF)，使用RCF計算各成分含量，并比較計算值與標(biāo)準(zhǔn)曲線法和外標(biāo)法

2、的實(shí)測值之間的差異，探究不同品牌色譜柱和儀器對RCF的影響及保留時間差和相對保留時間進(jìn)行色譜峰定位的準(zhǔn)確性，以驗(yàn)證方法的可行性和準(zhǔn)確性;以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH-黃酮為顯色體系，紫外分光光度法測定穿心蓮提取物中總黃酮含量。采用MTT法用4T-1和LLC腫瘤細(xì)胞株測試穿心蓮乙醇提取物和有效部位的體外抗腫瘤活性，發(fā)現(xiàn)抗腫瘤有效成分群;采用組分剔除法研究穿心蓮有效部位體外抑瘤起作用的有效成分;運(yùn)用單形格子實(shí)驗(yàn)，觀察不同組合對其

3、IC50值的影響，進(jìn)行有效成分的配伍優(yōu)化。
　　結(jié)果:
　　1、穿心蓮中DDA與A、GDA、DOA、NA和DA的RCF重現(xiàn)性良好(RSD＜5％)，RCF值分別為1.348、0.297、0.318、1.133、1.744。利用內(nèi)標(biāo)物的保留時間，結(jié)合相對保留時間與峰形，即可準(zhǔn)確判斷目標(biāo)成分的峰位。六批穿心蓮乙醇提取物中六種成分的計算值和實(shí)測值沒有顯著性差異(p=95％，n=6)。穿心蓮藥材中A、GDA、DOA、NA、DA和DDA

4、的含量分別為2.15％、0.21％、0.32％、0.72％、0.26％和0.77％;穿心蓮乙醇提取物中A、GDA、DOA、NA、DA和DDA的含量分別為5.81％、0.85％、0.86％、2.91％、1.46％和2.92％;穿心蓮有效部位中A、NA、DA和DDA的含量分別為45.38％、3.62％、8.08％和16.66％。
　　2、UV測定穿心蓮總黃酮含量，其線性方程為A=10.9110 C+0.0064，相關(guān)系數(shù)r=0.999

5、5，線性范圍:17.00-82.10μg/mL，總黃酮平均回收率為101.14％，RSD為3.16％。穿心蓮藥材、乙醇提取物和有效部位中總黃酮類含量分別為1.32％，15.05％和1.55％。
　　3、穿心蓮有效部位對4T-1和LLC細(xì)胞增殖IC50分別為26.91±3.33μg/mL，44.16±4.28μg/mL;穿心蓮乙醇提取物對4T-1和LLC細(xì)胞增殖IC50均大于100μg/mL。體外抗4T-1細(xì)胞增殖的組分剔除法研究結(jié)

6、果顯示，穿心蓮有效部位、全方配伍和A組的IC50分別為26.91±3.33μg/mL、46.64±6.24μg/mL和29.38±3.65μg/mL，配伍Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組的IC50分別為52.66±5.90μg/mL、43.22±2.52μg/mL和49.84±4.88μg/mL。體外抗LLC細(xì)胞增殖的組分剔除法研究結(jié)果顯示，穿心蓮有效部位、全方配伍和A組的IC50分別為44.16±4.28μg/mL、51.46±5.21μg/mL和40.

7、80±1.00μg/mL，配伍Ⅱ和Ⅲ組的IC50分別為50.59±1.26μg/mL和63.64±2.46μg/mL。單形格子實(shí)驗(yàn)獲得體外抗LLC細(xì)胞增殖的最優(yōu)處方:A和DDA(12∶1)配伍的IC50為32.69±2.07。
　　結(jié)論:
　　一測多評同時測定A、GDA、DOA、NA、DA和DDA六種二萜類成分，方法穩(wěn)定可靠，結(jié)果準(zhǔn)確可信，可用于穿心蓮提取物的質(zhì)量控制;擬建立的總黃酮測定方法穩(wěn)定可靠、重現(xiàn)性好、簡便易操作，可