中藥病毒克顆粒劑的研制及其抗NDV的藥理學(xué)研究.pdf

1、本試驗(yàn)研制中藥病毒克顆粒劑并探討其抗雞新城疫病毒(NDV)活性，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。為此進(jìn)行一系列試驗(yàn)并取得如下結(jié)果： 1.病毒克顆粒劑的研制：以黃芩甙含量和浸膏得率為檢測(cè)指標(biāo)，選擇提取時(shí)間、提取次數(shù)和醇沉?xí)r乙醇濃度3個(gè)因素，按L9(34)正交表優(yōu)選最佳提取工藝條件。用薄層色譜法(TCL)對(duì)制劑中的黃連、金銀花進(jìn)行定性鑒別，紫外分光光度法測(cè)定黃芩甙含量，建立病毒克顆粒劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。以黃芩甙含量及顆粒外觀顏色的變化為指標(biāo)，考察

2、溫度、濕度、光照對(duì)該制劑穩(wěn)定性的影響。 病毒克顆粒劑的最佳提取工藝條件為用10倍量的水煎煮2次，每次2h，醇沉?xí)r乙醇的濃度為55％。TCL能檢出黃連和金銀花，黃芩甙在1.0～5.0μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系r=0.9992(n=5)，平均回收率為97.73％，RSD為0.76％(n=5)；該法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好，可作為本品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。在強(qiáng)光照射條件下黃芩甙含量未發(fā)生明顯變化，但環(huán)境濕度愈高，黃芩甙含量及外觀顏色變化愈明顯；

3、顆粒劑的有效期為3年。 2.病毒克顆粒劑具有良好的抗雞NDV活性：采用細(xì)胞學(xué)技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞病變抑制法和MTT比色法檢測(cè)病毒克顆粒劑在雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)中對(duì)NDV增殖的影響；以病毒唑?yàn)閷?duì)照藥品，通過(guò)血凝效價(jià)測(cè)定評(píng)價(jià)該制劑在雞胚中對(duì)NDV的抑制作用；采用人工感染防治試驗(yàn)和臨床治療試驗(yàn)，對(duì)其體內(nèi)抗NDV活性和治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。 病毒克顆粒劑對(duì)CEF的半數(shù)中毒濃度(TC50)為61.35mg/ml，抗NDV的半數(shù)有效濃度(

4、EC50)為3.2mg/ml，治療指數(shù)(TI)為19.2；對(duì)NDV有預(yù)防和中和作用，并存在明顯的量效關(guān)系(P＜0.01)，感染后9小時(shí)以?xún)?nèi)給藥能有效地抑制NDV的復(fù)制。對(duì)雞胚的最大無(wú)毒劑量大于700mg，預(yù)防組、治療組的HA效價(jià)均極顯著低于攻毒對(duì)照組(P＜0.01)，明顯推遲NDV引起雞胚死亡時(shí)間。病毒克顆粒劑高、中劑量組的療效高于散劑組(p＜0.01)，而低劑量組的療效與散劑組相當(dāng)(P＞0.05)。治療臨床發(fā)生的典型和非典型性雞新城疫

5、有效率高于95％，極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。病毒克顆粒劑對(duì)NDV在雞胚成纖維細(xì)胞中和雞胚中的增殖具有明顯的抑制作用，對(duì)雞新城疫的療效優(yōu)于同劑量散劑。 3.病毒克顆粒劑能顯著增強(qiáng)雞的免疫功能：海蘭褐雛雞隨機(jī)分成預(yù)防組、治療組和對(duì)照組，NDV攻毒前后按設(shè)定程序給于病毒克顆粒劑。分別于攻毒后7、14、21天測(cè)定各組ND-HI抗體和免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的總量；17天各組紅細(xì)胞IC花環(huán)率、C3b受體花環(huán)率和20天免疫器

6、官指數(shù)(法氏囊、胸腺、脾臟)等指標(biāo)，觀察病毒克顆粒劑對(duì)雛雞免疫功能的影響。 病毒克顆粒劑治療組和預(yù)防組ND-HI效價(jià)和免疫球蛋白總量均呈上升趨勢(shì)，在14、21天時(shí)治療組的ND-HI效價(jià)顯著高于對(duì)照組。在7天時(shí)，預(yù)防組和治療組的IgA、IgM極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。用藥組C3b受體花環(huán)率、IC花環(huán)率均極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。治療組胸腺指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)；預(yù)防組脾指數(shù)顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)

7、。病毒克顆粒劑對(duì)ND患雞的免疫功能具有顯著的增強(qiáng)作用。 4.病毒克顆粒劑顯著改善新城疫患雞的肝腎功能：海蘭褐蛋雛雞隨機(jī)分成陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、預(yù)防組和治療組，攻毒前后按設(shè)定試驗(yàn)程序給予病毒克顆粒劑。于攻毒后10天各組雞心臟采血，分離血清測(cè)定其生化指標(biāo)，評(píng)價(jià)病毒克顆粒劑對(duì)新城疫病雛雞肝腎功能的影響。 預(yù)防組和治療組血清尿素氮、尿酸、肌酐和乳酸脫氫酶的含量極顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組(p＜0.01)；谷革轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量