辛伐他汀對血脂正常大鼠缺血再灌注后心肌損傷的預保護及作用機制.pdf

1、目的：本課題主要研究辛伐他汀在缺血再灌注心肌損傷中的抗炎作用。缺血再灌注損傷心肌在許多危重疾病狀態(tài)是不可避免的。目前有研究表明缺血再灌注的心肌損傷部分與中性粒細胞、血管內皮細胞和心肌細胞的相互作用有關，同時細胞因子起著調節(jié)和修飾作用。他汀類藥物，3-羥基-3甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)抑制劑，不僅能降低血脂水平，而且有獨立于降脂作用的其它心肌作用。本課題通過觀察不同條件下不同時段大鼠心肌缺血再灌注后血清腫瘤壞死因子(Tumorne

2、crosisfactor-alphaTNF-a)和組織中白細胞介素-4(Interlukin-4IL-4)、髓過氧化物酶(MyeloperoxidaseMPO)、丙二醛(MalondialdehydeMDA)的動態(tài)變化，研究辛伐他汀對在體血脂正常大鼠缺血再灌注損傷心肌的預保護作用，探討其減少心肌損害的可能機制，為辛伐他汀更廣泛的應用于臨床提供理論依據(jù)。 材料和方法：雄性Wistar大鼠72只，隨機分為四組：(1)假手術組(Sha

3、m，n=9，生理鹽水2ml/d灌胃5w)：只于左冠狀動前降支處進針而不結扎；(2)缺血再灌注組(IR，n=21，生理鹽水2ml/d灌胃5w)：結扎大鼠左冠狀動脈前降支造成心肌缺血30分鐘后再開放；(3)辛伐他汀預處理組(Sim，n=21，5mg/kg/d，灌胃5w)：手術操作同IR組；(4)缺血預處理組(IPC，n=21，生理鹽水2ml/d灌胃5w)：結扎大鼠左冠狀動脈前降支，缺血5分鐘，再灌注5分鐘，反復2次后，缺血5分鐘，再灌注10

4、分鐘，最后行缺血30分鐘后開放。每組又分缺血30分鐘、再灌注30分鐘、再灌注90分鐘三個時段。根據(jù)入選標準和退出標準確定造模成功后，分別測定血清中TNF-a,心肌組織中MPO、MDA、IL-4，行缺血區(qū)心肌HE染色，肉眼觀察心肌細胞變性及中性粒細胞浸潤情況。所有實驗數(shù)據(jù)用SAS版軟件包做統(tǒng)計學處理，均以P＜0.05為有統(tǒng)計學差異。 結果：1血脂的變化四組Wistar大鼠的血脂水平無顯著差異(1.75±0.55vs1.98±0.1

5、8vs1.89±0.23vs1.74±0.30mmo1/1，P＞0.05)。 2心肌勻漿MDA含量在缺血再灌注中的變化同一組再灌注心肌組織MDA含量均隨再灌注時間延長而遞增。IR組、Sim組、IPC組中，三時間段MDA含量差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，分別為(1.74±0.11)vs(2.07±0.12)vs(2.88±0.20)nmol/mgprot，(1.55±0.24)vs(1.65±O.15)vs(2.28±0.24

6、)nmo1/mgprot，(1.40±0.16)vs(1.62±O.15)vs(2.31±O.29)nmo1/mgprot。同一時間段，IR組MDA含量均高于Sham組、Sim組和IPC組，其中再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時，Sim組和IPC組MDA含量均高于Sham組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但IPC組和Sim組心肌組織中MDA含量無顯著差異(P＞0.05)。

7、 3心肌勻漿MPO含量在缺血再灌注中的變化同一組再灌注心肌組織中MPO含量隨時間變化增加。IR組、IPC組、Sim組中MDA含量在三時間段變化有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，分別為(4.47±0.27)vs(5.40±0.29)vs(6.57±0.26)單位/克濕片，(3.75±0.43)vs(4.87±0.30)vs(5.74±0.30)單位/克濕片，(3.75±0.48)vs(4.48±0.34)vs(5.64±O.33)單位/

8、克濕片。四組比較：同一時間段，IR組MPO含量均高于Sham組、Sim組和IPC組，其中再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時，Sim組和IPC組MPO含量均高于Sham組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但IPC組和Sim組MPO含量無顯著差異。 4心肌組織中IL-4在缺血再灌注中的變化同一組再灌注心肌組織中IL-4含量隨時間變化增加。IR組、Sim組、IPC組中IL-

9、4含量在再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，分別為(54.83±5.78)vs(100.72±10.35)pg/gprot，(56.71±10.9)vs(85.28±6.98)pg/gprot，(57.88±11.16)vs(74.02±12.01)pg/gprot。四組比較：同一時間段，IR組IL-4含量均高于Sham組、Sim組和IPC組，以再灌注90分鐘時差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。再灌注90分鐘時

10、，Sim組和IPC組IL-4含量均高于Sham組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但IPC組和Sim組IL-4含量無顯著差異。 5血清TNF-a在缺血再灌注中的變化同一組中再灌注心肌組織中TNF-a含量隨時間變化增加。IR組、Sim組、IPC組中TNF-a含量在三時間段變化有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，分別為(1.25±0.07)vs(L43±0.11)Vs(1.93±0.20)ng/ml，(1.23±0.02)Vs(1.36±0

11、.09)vs(1.68±0.13)ng/ml，(L24±0.04)vs(1.38±O.07)vs(L67±0.04)ng/ml。均以再灌注30分鐘和再灌注90分鐘兩時間段間差異顯著(P＜0.01)。四組比較：同一時間段，IR組TNF-a含量均高于Sham組、Sim組和IPC組，其中再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。再灌注30分鐘和再灌注90分鐘時，Sim組和IPC組TNF-a含量均高于Sham組，有統(tǒng)計學

12、意義(P＜0.05)，但IPC組和Sim組TNF-a含量無顯著差異。 6病理H-E染色結果缺血前正常心肌組織中心肌纖維排列整齊，細胞邊界完整，心肌橫紋清晰。I/R組中，缺血30分鐘，缺血區(qū)心肌中出現(xiàn)少量中性粒細胞浸潤，大血管中可見少量中性粒細胞附壁，缺血區(qū)心肌細胞腫脹變性，未見明顯壞死灶。再灌注90分鐘，再灌注心肌細胞中可見大量中性粒細胞浸潤，累及心肌層和心外膜，大小血管內外均可見大量中性粒細胞附壁聚集。大量心肌細胞水腫、變性、

13、壞死，橫紋不清楚。藥物預處理組和IPC組，再灌注90分鐘，心肌細胞中可見局部中性粒細胞浸潤，累及心肌層和心外膜，大小血管內外均可見中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞附壁聚集，橫紋不清楚，但程度較I/R組減輕。 結論：1本研究通過觀察IR、Sim、IPC三組大鼠缺血30分鐘、再灌注30分鐘、再灌注90分鐘MDA、MPO、TNF-a、IL-4的含量或活性的變化，發(fā)現(xiàn)缺血再灌注后心肌損傷程度與上述因子的表達水平有關，呈正相關。 2

14、Sim組和IPC組中MDA、MPO、TNF-a、IL-4水平在各時段均低于IR組，而Sim組和IPC組中差別不顯著，表明辛伐他汀藥物治療和缺血預處理能抑制TNF-a的釋放，減少中性粒細胞浸潤和氧自由基產生，減輕缺血再灌心肌損傷，這可能與辛伐他汀仰制NF-kB活性，降低黏附分子表達，改善內皮功能，促進NO合成和IL-4表達有關。 3辛伐他汀和缺血預處理對缺血再灌注心肌損傷的干預效果短時間內(再灌注90分鐘)無明顯差別，提示辛伐他汀