變形鏈球菌表面蛋白抗原Ⅰ-Ⅱ唾液結(jié)合區(qū)段（SBR）基因表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá).pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文變形鏈球菌表面蛋白抗原ⅠⅡ唾液結(jié)合區(qū)段（SBR）基因表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)姓名：張苗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：口腔內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：楊丕山2002.11.10山東大學(xué)碩士學(xué)位論文／方法：、1分別對(duì)原核表達(dá)質(zhì)粒pSBR—CTA2B、載體質(zhì)粒pcMVT7以限制性?xún)?nèi)切酶NcoI、XhoI雙酶切，回收SBR片段與載體大片段，以定向克隆的方法，構(gòu)建閱讀框架正確的原核表達(dá)質(zhì)粒pcMVT7一SBR。2重組質(zhì)粒pcMVT7一SBR轉(zhuǎn)化大腸

2、桿菌JMl09(DE3)，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物。3用親和層析的方法純化提純得到羧基端有6個(gè)組氨酸的SBR融合蛋白，用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)純化蛋白，用紫外分光光度法測(cè)定純化蛋白的濃度。結(jié)果：成功構(gòu)建了閱讀框架正確的原核表達(dá)載體pcMVT7一SBR；在大腸桿菌JMl09(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)了SBR融合蛋白：通過(guò)親和層析的方法純化得到SBR融合蛋白，表達(dá)量高達(dá)29。73％。結(jié)論：通過(guò)限制性?xún)?nèi)切酶酶切初