環(huán)磷酰胺預處理、短程環(huán)孢素A聯(lián)合骨髓腔內(nèi)輸注供者骨髓誘導大白兔特異性免疫耐受的研究.pdf

1、【目的】通過對受者環(huán)磷酰胺預處理、短程環(huán)孢素A應用及供者骨髓細胞、供受者融合后骨髓細胞骨髓腔內(nèi)輸注，觀察對移植皮膚存活的影響，進而探索一種適合臨床應用的誘導免疫耐受的方法。【材料與方法】雌、雄性新西蘭大白兔各36只，15-20周齡，重2.0-2.5Kg，購自南昌大學醫(yī)學院動物中心，飼養(yǎng)于南昌大學第一附屬醫(yī)院動物房。雄性作為供者，雌性作為受者，隨機配對，將36對大白兔再隨機分為6組：即空白對照組、單純預處理組、單純骨髓輸注組、實驗1組、實

2、驗2組、無關供體對照組。實驗l組應用環(huán)磷酰胺100mg/kg/d(-4-3d)、環(huán)孢素A(10mg/kg/d(-1-+10d)+供者造血干細胞骨髓腔內(nèi)輸注組(骨髓單個核細胞4×10<'8>)，實驗2組應用環(huán)磷酰胺100mg/kg/d(-4——3d)、環(huán)孢素A(10mg/kg/d(-1—+10d)+供、受體融合后骨髓細胞骨髓腔內(nèi)輸注。各組在輸注骨髓的同一天進行皮膚移植，觀察移植皮膚存活時間、對第三者皮膚的排斥反應及對供體的單向混合淋巴細胞

3、反應，并用多聚酶鏈反應(PCR)檢測Y染色體特有的性別決定基因(SRY)以證實嵌合體的形成。【結果】(1)單純骨髓細胞輸注組和單純低劑量預處理+環(huán)孢素A組在移植后30天均檢測不到供受者混合嵌合體，移植皮膚的存活時間分別為11.33±0.82天、16.33±1.21天；聯(lián)合應用低劑量的預處理、短程免疫抑制劑和供者骨髓細胞輸注組在移植后30天可檢測到供受者混合嵌合體，移植皮膚存活時間為44.67±3.20天；供受者融合細胞輸注組移植皮膚存活

4、時間為39.67±1.21天，骨髓移植后30天可檢測到嵌合體。實驗1組皮膚存活時間(44.67±3.20天)、實驗2組(39.67±1.21天)比空白對照組(10.83±0.75天)、單純預處理組(16.83±1.21)、單純骨髓輸注組(11.33±0.82天)、無關供體±1.47天)明顯延長(P<0.01)。 (2)供者骨髓細胞輸注與供、受者融合后骨髓細胞輸注比較，移植皮膚生存期無顯著性差異(P>0.05)。(3)耐受誘導20天時，

5、第四、第五組受者對供者淋巴細胞的單向混合淋巴細胞反應較移植前特異性降低，A490值分別為(0.41±0.063)、(0.45±0.019)，移植前為(1.44±0.041)，對無關第三者的反應性為(1.35±0.680)，移植后與移植前及無關第三者相比較，差異均有顯著性(P<0.01)，移植前與無關第三者比較無顯著差異(P>0.05)。【結論】1、在大白兔動物模型中，采用環(huán)磷酰胺預處理、短程環(huán)孢素A免疫抑和輸注供者骨髓細胞能誘導供受者造